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蛋白表達方式篇一
一、膠原蛋白基礎知識
1、什么是膠原蛋白？
蛋白質是以氨基酸為基本單位構成的生物大分子，是生命的物質基礎，沒有蛋白質就沒有生命，機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。而膠原蛋白是人體內最多的一種蛋白質，占了人體蛋白質總和的30—40%。
2、什么是膠原蛋白多肽？
膠原蛋白是大分子蛋白質，其分子量在30萬以上，人體很難消化吸收。膠原蛋白多肽是分子量3000—20000左右的小分子蛋白，具有很好的生物功能性和較高的消化吸收性，吸收率可達95—100%，現(xiàn)在食品界所說的膠原蛋白其實都是指膠原蛋白多肽。
3、膠原蛋白對人體各部位的作用
皮膚——皮膚可分表皮、真皮及皮下組織三層，最外表為表皮，可防止外界異物入侵。由表皮外側往內，依次是角質層、透明層、顆粒層、有棘細胞層及基底細胞層等五層細部結構，由于基底細胞層會有老舊細胞向上層頂升，大約兩個星期左右到達最外層，所以角質層最后會成為污垢而剝落。皮下真皮組織的70％是膠原蛋白，皮膚有如一個大套子緊緊包住身體各處，表面積相當大，人體四肢活動時，皮膚中膠原蛋白發(fā)揮功能，使皮膚具有保護功能，又有適當彈性及堅硬度，所以膠原蛋白能夠保持皮膚象20歲時的緊致、柔嫩感。表皮的基底膜與真皮中的膠原蛋白緊密結合，真皮呈現(xiàn)波浪狀也使得表皮隨之起伏。手腳能自由彎曲，跳高時具有彈性，主要歸功于膠原蛋白。膠原蛋白在皮膚結構中是緊緊包住真皮層中的毛根皮脂腺以及細胞。皮膚老化后會失去彈性，主要也與膠原蛋白有關。
眼睛——角膜和結膜組織的主要成分是膠原蛋白，補充膠原蛋白能夠有效預防眼部疾病。頭發(fā)——頭發(fā)的健康關鍵在于頭發(fā)的基礎頭皮皮下組織的營養(yǎng)，位于真皮層膠原蛋白是表層及表皮附屬物的營養(yǎng)供應站，表皮附屬物主要是毛發(fā)與指甲，皮膚缺乏膠原蛋白，頭發(fā)就會干燥分叉。另外構成頭發(fā)的角蛋白與膠原蛋白結構極為相似，補充膠原蛋白能夠增強發(fā)質潤澤。
牙齒——牙齒主要成分之一的象牙質的18％和組成牙齦和牙根的組織成分大部分為膠原蛋白，平時口服補充膠原蛋白就能夠有效預防牙齦炎等牙齒、口腔疾病。
指甲——前面已經(jīng)提到位于真皮層膠原蛋白是表皮層及表皮附屬物的營養(yǎng)供應站，指甲是表皮附屬物，人體膠原蛋白流失，指甲容易斷裂、晦暗無光澤。
胸部——乳房主要由結締組織和脂肪組織構成，而挺拔豐滿的乳房很大程度上依靠結締組織的承托，膠原蛋白是結締組織的主要成分，在結締組織中膠原蛋白常與多糖蛋白相互交織成網(wǎng)狀結構，產(chǎn)生一定的機械強度，是承托人體曲線，體現(xiàn)挺拔體態(tài)的物質基礎。補充膠原蛋白，可以起到自然豐胸效果。
內臟器官——機體五臟六腑沒有不受膠原蛋白影響的，缺乏膠原蛋白會嚴重影響臟器健康甚至引發(fā)各種疾病，充分補充膠原蛋白可以協(xié)助內臟器官營養(yǎng)補充和運動，有效預防疾病。骨骼——骨骼中有機物的70%～80%是膠原蛋白，骨骼生成時，首先必須合成充足的膠原蛋白纖維來組成骨骼的框架。因此，有人稱膠原蛋白為骨骼中的骨骼。膠原蛋白的流失或缺乏會引起骨質疏松等疾病。筋腱——構成骨骼與肌肉相聯(lián)的筋腱的成分80％是膠原蛋白。缺乏膠原蛋白會因起筋腱與肌肉的衰弱。因此，補鈣應先補充膠原蛋白
關節(jié)——關節(jié)是骨與骨間的軟骨，軟骨的50％構成物質是膠原蛋白，人體由于膠原蛋白流失與缺乏而導致的關節(jié)病癥情況較多。
4、膠原蛋白適用人群 ※健康人群
※亞健康人群，如易疲勞，睡眠不好，記憶力減退，未老先衰的人群
※皮膚粗糙、多斑、起皺，彈性差、光澤度下降的人群
※骨質疏松、長期補鈣效果不明顯，需要增加骨酪韌性的人群
※患有關節(jié)炎、關節(jié)疼痛的人群
※腸胃不好，消化系統(tǒng)有疾病的人群
※身材偏瘦、曲線平坦、女人味不濃的女性
※身體弱小，不夠健壯的男性
※術后康復，需要補充營養(yǎng)的人群
二、膠原蛋白的美容作用
膠原蛋白是維持皮膚與肌肉彈性的主要成分。但隨著年齡增加，皮膚與肌肉中的水分會減少這是老化的開始。此時，膠原蛋白纖維開始變?yōu)榧毿?，彈性蛋白之彈性也會減低，原先真皮中膠原蛋白與彈性蛋白交互構成有規(guī)則的網(wǎng)目結構會逐漸崩解，最后導致皺紋的生成。所以補充膠原蛋白能使皮膚保持年輕，道理即在于此。在國外，對膠原蛋白在美容方面的作用已進行深入的研究。試驗證明：0．01％的膠原蛋白純溶液就有良好的抗各種輻射的作用，且能形成很好的保水層，能供給皮膚所需要的全部水分。膠原蛋白應用于美容中的功效總結起來有如下幾點
1、緊膚平皺的作用：
膠原蛋白通過表皮進入真皮層組織后，能迅速填補局部塌陷，改善松弛的皮膚，收緊皮膚，減少深皺紋、平復細紋?？s小毛孔，使皮膚緊繃且富有彈性。膠原蛋白使細胞變得豐滿，從而使肌膚充盈，保持肌膚彈性與潤澤，維持肌膚細膩光滑，皺紋舒展，呈現(xiàn)質感和透明感，有效防止老化。
2、保濕滋潤的作用：
膠原蛋白本身是一種由三條螺旋形肽鏈聚合構成的透明狀物質，這三種螺旋結構能牢牢的瑣住水分和營養(yǎng)，讓皮膚時刻保持豐潤、水嫩的狀態(tài)。膠原蛋白中還含有羥脯氨酸和絲氨酸，是天然的保濕因子，防止水分流失，維持皮膚彈性與活力。另外，因為膠原蛋白保水性及緊縮性的雙重作用，還可改善干性及油性肌膚的分泌狀態(tài)，調整皮膚表面的油脂平衡，使其逐漸趨于中性肌膚，毛孔緊縮細致。
3、恢復彈性的作用：
膠原蛋白進入人體后，經(jīng)過吸收，生成新生細胞與原細胞結合，填補凹陷部位，使皮膚恢復彈性、柔韌充盈。
4、修復組織的作用：
膠原蛋白進入人體后，逐漸生成新生組織與周圍正常皮膚共同協(xié)調，從而起到矯形作用，恢復正常外觀，同時也可減輕患者的生理痛苦。對擴大性痤瘡疤痕，皮內或皮下組織受損，上皮收縮，深度皺紋或者其他軟組織的缺損均有明顯的改善作用。
5、美白淡斑的作用：
膠原蛋白能使細胞粘接更緊密，阻止酪氨酸轉化為黑色素，不給黑色素、毒素藏身之地，令皮膚膚色白暫、色斑淡出。
6、減肥美體的作用
減肥需要燃燒脂肪（分解代謝），而膠原蛋白能使這種分解代謝過程增加和延長，燃燒更多的脂肪從而達到減肥的目的。并且膠原蛋白對細胞的修補機能會消耗大量熱能，這種機能會消耗大量熱能，這種機能必須在睡眠狀態(tài)下進行，因此服用膠原蛋白，睡覺就能減肥，輕松減肥的夢想變成了現(xiàn)實。由于這種減肥方法效果溫和持久（口服膠原蛋白后，熟睡無進食狀態(tài)下提高脂肪燃燒率 60% 左右），對于正在減肥的人，口服膠原蛋白不僅能夠加速脂肪燃燒，而且由于膠原蛋白能促進皮膚深層纖維組織的張力與彈性，使得減肥后的皮膚仍然具有彈性和光澤，防止出現(xiàn)皮膚松弛、下垂、脫水等常見的減肥并發(fā)癥。
7、豐胸健美乳房的作用
乳房的健美對女性至關重要。豐滿、堅挺的乳房不僅展示了女性的曲線形體美，更體現(xiàn)了女性的自信和自尊。
首先，隨著年齡的增長，乳房皮膚中膠原蛋白含量不斷減少，口服活性膠原蛋白在保養(yǎng)面部皮膚的同時，保養(yǎng)著全身皮膚，乳房上的皮膚也沒有被遺忘。經(jīng)服用膠原蛋白后，乳房上的皮膚得到養(yǎng)護，彈性增強、色澤改良。
第二，也是最重要的原因，補充膠原蛋白對整個乳房實體有營養(yǎng)保健的作用。組織學研究表明，乳房主要由結締組織和脂肪組織構成。而結締組織的主體就是膠原纖維組織。發(fā)育幼小的乳房補充活性膠原蛋白后，乳房則膨大隆起。老年松弛的乳房中脂肪比例大、膠原比例小、乳房則下垂、松懈。
其三，膠原纖維有繃緊乳房的作用?？诜z原蛋白的健胸作用不僅僅局限于增大乳房的體積，更重要的作用是能上提下垂的乳房及繃緊松弛的乳房。分析乳房的結構可以看到，年輕時，皮膚的致密結締組織纖維（由膠原纖維組成）將乳腺牢固懸系和固定在皮膚上，行使著系帶和“繩索”的功能，使乳房挺拔秀麗。隨著歲月流失，膠原纖維三螺旋變得松懈（就象老化的松緊帶一樣失去拉力），不能將乳房拉緊，造成了乳房扁平下垂。而服用膠原蛋白可以糾正乳房的這種衰老退化現(xiàn)象。
7、消除黑眼圈和眼袋的作用
黑眼圈現(xiàn)象是因為人的眼睛組織較為松弛，眼袋現(xiàn)象則是因為眼部皮膚下垂造成的。由于該部位的皮膚薄，組織結構一旦松弛，血液就會聚積，導致黑眼圈和眼袋的發(fā)生。膠原蛋白是結締組織的重要成分，給皮膚提供支撐力、張力，使皮膚緊實，從而改善黑眼圈和眼袋。
8、美發(fā)亮甲的作用
缺少膠原蛋白，頭發(fā)會干枯分叉，膠原蛋白能營養(yǎng)發(fā)絲，解決頭發(fā)分叉，讓頭發(fā)潤澤有彈性。軟潤指甲 滋養(yǎng)甲面 可改變指甲黯淡無光、發(fā)黃、斷裂和指甲色素沉淀等種種煩惱，膠原蛋白能使您的指甲表面不僅光滑亮麗，而且還能使指甲強韌不易斷裂。
9、美洋1800魚膠原蛋白的美容療效 ※服用1—4周
迅速補充缺失水分，皮膚濕潤度增加，皮屑減少；皮膚不再油膩、粗糙、干燥；皮膚比服用前略白，撫摸時明顯感覺柔滑滋潤?！?—8周
經(jīng)過第二個月的繼續(xù)修復和補充，全身皮膚都會變得水嫩亮白，色斑、皺紋、魚尾紋、痘印、黑眼圈、眼袋等開始淡化，皮膚鎖水能力加強，肌膚非常緊致，有彈性，皮膚亮白度平均提高2-6度。
※服用9——15周 三、四個月的服用過后，皮膚已輕松恢復到了年輕時的細膩、緊致，細紋、眼袋、黑斑、痘印、暗瘡基本消失，指甲表面也變的光滑亮麗，頭發(fā)柔順有光澤，整個人氣色大變，精神矍鑠、神采奕奕！
※服用16—22周
前期的效果將得到綜合鞏固和提升，皮膚抵抗外界刺激的能力和自我恢復能力顯著加強，皮膚如新生嬰兒般一塵不染，紅潤有光澤，嬌柔動人，指甲也富有彈性和韌性，乳房豐滿，骨骼強硬，走路腿腳有力。全身由內而外，從根本上徹底恢復到年輕時的狀態(tài)，魅力、自信、年輕的女人非你莫屬！
三、膠原蛋白的健康作用
膠原蛋白是由成纖維細胞合成的，但隨著人的年齡增長，以及自由基的大量產(chǎn)生，膠原蛋白結構也在發(fā)生變化并漸漸流失（正常人體每年會流失1%的膠原蛋白），導致體內的膠原蛋白含量和種類發(fā)生劣化。與此同時，成纖維細胞的合成能力下降，膠原蛋白的降解卻加快，直接導致可溶性膠原蛋白逐漸減少，細胞間具有很好儲水性的粘多糖也減少，結締組織彈性低下，皮膚就會失去彈性并變薄、老化。不僅僅如此，導致真皮的纖維斷裂、脂肪萎縮、汗腺及皮脂腺分泌減少，使皮膚變得干燥、皺紋增多、出現(xiàn)色斑等，這些現(xiàn)象都是“衰老”的表現(xiàn)！這種衰老現(xiàn)象不斷地隨著年齡的增長而加劇，直觀地表現(xiàn)為：
※ 面部出現(xiàn)皺紋和老人斑?！?皮膚發(fā)暗和失去光澤?！?皮膚粗糙和彈性變差?！?動脈血管硬化。
※ 眼球晶體出現(xiàn)老年性白內障、角膜透明度減小。※ 胳膊腿不靈活甚至關節(jié)疼痛等現(xiàn)象。
而膠原蛋白在人體的皮膚、骨質、肌腱以及其他結締組織中參與細胞的遷移、分化和增殖，具有有很強的生物活性和生物功能，是新陳代謝的促進劑，促進人體內膠原蛋白的合成，減緩生物組織衰老和功能減退。因此，膠原蛋白對于老年人、更年期婦女、運動過度者、骨折者或關節(jié)容易酸痛者提高生命健康質量尤為重要。
1、膠原蛋白和補鈣的關系
隨著醫(yī)學科學的進步，人們對于補鈣的認識也不斷深化。五六十年代醫(yī)學上提倡補鈣；七八十年代認識到維生素d3利于鈣的吸收，提倡曬太陽和補充d3；現(xiàn)在才明白，人體主要不是缺鈣而是特別需要補充膠原蛋白來吸附和固定鈣。
人體內的鈣，主要存儲在骨骼和牙齒里，少部分在血漿中（常說的血鈣）。骨鈣與血鈣處于互相調節(jié)的過程中。食物里的鈣經(jīng)消化由腸道吸收進入血液，血漿里的蛋白質（起作用的主要是基中的羥脯氨酸）把鈣運送到去由成骨細胞礦化后形成骨質、牙齒等組織。血漿里的鈣濃度過低的話，骨鈣會溶解出來補充到血液里。一般來說，血液中羥脯氨酸的含量是吸收鈣的一個重要指標。膠原蛋白中含有其它蛋白質無法比較的豐富的羥脯氨酸和羥賴氨酸，而羥脯氨酸不僅僅是將血漿中的鈣運送到骨細胞的運載工具，骨組織中的骨膠原羥基磷鈣的黏合劑，骨質就是羥基磷酸鈣與骨膠原的結合體。由此，我們明白一個道理：補鈣，應該是膠原蛋白的補充在先，其次才是鈣質的補充。只要人體能夠攝入足夠的膠原蛋白，并且膠原蛋白的代謝功能是正常的，就不必特意額外地攝取鈣。
2、膠原蛋白的降血糖作用
膠原蛋白中含有膠原蛋白多肽-鉻，小白鼠動物實驗發(fā)現(xiàn)膠原蛋白多肽 – 鉻（iii）螯合物對于糖尿病空腹血糖的降低、增加肝糖原的合成及葡萄糖激酶的活性、控制甘油三酯、膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇，提高高密度脂蛋白膽固醇水平有明顯的作用。結果表明這種膠原多肽-----鉻有降血糖、降血脂及抗應激的保健功能
3、膠原蛋白的降壓作用
三大現(xiàn)代疾?。悍逝?、高血壓和血液中高甘油三酯、高膽固醇，嚴重威脅人類生活質量。膠原蛋白中還有一定量的骨膠原九肽，九肽可以抑制造成高血壓的血管緊張素轉化酶（ace）活性，動物實驗也證明了它顯著降低高血壓大鼠的動脈血壓。食物中的膠原蛋白在體內消化過程中，也有可能會水解出這樣的九肽，具有抑制血管緊張素轉換酶活性的作用，可降低血甘油三脂和膽固醇，從而降低血壓。膠原蛋白還對血管內皮細胞具有明顯的促進增殖作用，即對血管損傷有一定的保護和修復作用。因此，有利于降低體重和血脂，適用于超重病人和動脈硬化的病人。
4、膠原蛋白抑制癌細胞的作用
癌細胞的增殖和轉移是兩種不同的表現(xiàn)形式。
首先是癌細胞的增殖，癌腫瘤是一個充滿毛細血管的血包，癌細胞為了獲取大量的營養(yǎng)成分，就要瘋狂地分泌出血管形成因子taf來使毛細血管急速增加，因為毛細血管是癌細胞獲取營養(yǎng)成分的通道。
其次是癌細胞的轉移。當癌細胞要轉移到別的臟器時，首先要往該器官深處移動，以獲得更好的發(fā)展環(huán)境。任何器官表面都有膠原蛋白構成的基底膜保護著。所以癌細胞就必須要穿透該處的膠原蛋白構成的基底膜組織進入該器官，并且必須到達有血管的部位。然后，癌細胞再進一步穿透血管（血管的中間層就是膠原蛋白構成的），進入該血管并隨著血管內血液循環(huán)，以便快速移動擴散到其他部位。
事物總是矛盾的，癌細胞要增殖和轉移，機體內就有抑制癌細胞增殖和控制癌細胞轉移的機制。
首先，每個單獨的細胞外面被細胞外基質（主要是膠原蛋白）包裹著，細胞與細胞之間的連接也是靠細胞外基質粘連起來的，細胞外基質在腫瘤形成中起著關鍵的作用。因為癌腫瘤的表面被膠原纖維包裹著，膠原纖維的作用之一就是抑制癌細胞的生長和轉移。任何健康的人每天都有至少數(shù)以千計的癌細胞產(chǎn)生，甚至許多人至死都是癌腫瘤攜帶者。為什么有人發(fā)病成為癌癥患者，而有些人就沒有呢?有的癌患者就可以控制住癌細胞的增殖和轉移，而有的患者就控制不住。實際上，包裹在癌細胞外側的膠原蛋白就是“防衛(wèi)軍”，無時無刻地與癌細胞在進行卓絕的“攻守之戰(zhàn)”。身體有足夠的膠原蛋白的話，膠原纖維就會把癌細胞緊緊地包裹，使其不能任意增殖擴散。當人體缺乏膠原蛋白的時候，癌細胞突破這一防線就開始肆虐增殖和轉移。
另外，當人體的免疫蛋白與膠原蛋白結合，巨噬細胞、淋巴細胞、血漿細胞及免疫球蛋白等免疫機能就會總體性提高，可以吞噬癌細胞。
膠原纖維還能約束息肉增生和良性瘤的擴大。尤其當患有這些疾病的時候，由于身體需要大量的膠原蛋白，而人體自我合成速度又不足以滿足身體需要的話，就必須通過食物補充膠原蛋白。通過食物還不能有效補充膠原蛋白的話，身體就只好“東拆西借”----分解身體其它部位的膠原組織向病灶供給。所以，我們常常看到末期癌癥患者身體消瘦、骨架縮小就是這個緣故。
尤其，癌癥患者接受的化療、放療、電療等療法，在消滅癌細胞的同時，敵我不分地將包裹在腫瘤外層的膠原纖維也分解摧毀了。而腫瘤一旦暴露后，失去膠原纖維的束縛，更加加速了癌細胞的擴散速度。因此，癌癥患者更需要補充膠原蛋白加強輔助治療
5、膠原蛋白與免疫機能
人體的免疫力的高低因人而異，原因很多。但是，基本原因是免疫球蛋白、淋巴球與巨噬細胞等免疫細胞在發(fā)現(xiàn)外來異物侵入機體時，會將異物包圍吞噬，甚至自我犧牲以保護身體。所以，免疫細胞越多越強壯，身體免疫力越高。
研究表明，膠原蛋白與免疫蛋白相結合就可以有效地增強人體免疫系統(tǒng)的免疫力。
當免疫細胞隨血液流經(jīng)身體各處時，會透過血管壁，接近外來的異物（如細菌、病毒等），若這一部位膠原蛋白含量豐富的話，免疫細胞就與膠原蛋白有機結合起來，共同對抗入侵異物。這一生物活動一旦發(fā)生，身體就像接到全體總動員令一樣，一連串的免疫機能都被激活，巨噬細胞、淋巴球、血漿細胞及免疫球蛋白等免疫機能就會提高，人體抵抗力也就增強了。
6、膠原蛋白與兒童和青少年發(fā)育
影響兒童和青少年發(fā)育的因素，除了遺傳因素（占40~50%），營養(yǎng)因素是最重要的。營養(yǎng)因素中，蛋白質的影響最為直接。過去，日本人的身高不如中國人，而最新的統(tǒng)計結果，我國7歲男女兒童的平均身高分別比日本同齡兒童低0.6厘米和0.5厘米，15~18歲男女青少年分別平均比日本同齡者矮1.4厘米和0.6厘米。拔除掉遺傳因素外，無疑與營養(yǎng)素攝入多少有直接關系。
人體中的礦物質約占體重的5%，其中的鈣約占體重的2%。鈣的總量的99%。分頁在骨骼和牙齒中，其余1%分頁在血液、細胞間液及軟組織中。人在20歲之前是骨骼的生長階段，有兩個生長高峰期：第一個高峰1歲以前，如果發(fā)育遲緩就會出牙晚、學步晚、雞胸。第二個高峰是12~14歲，如果發(fā)育遲緩就會身材矮小、生長痛等。
動物實驗發(fā)現(xiàn)，給幼馬飲料中添加膠原蛋白，通過對關節(jié)間隙的測定結果表明，與對照組相比較，幼馬的軟骨生長茁壯、鬃毛稠密，體高47%，馬蹄生長37%。這說明，生物體發(fā)育期對于骨質發(fā)育的需求。膠原蛋白是治療缺鈣癥的激活劑，對彌補動物的幼年期、青春期對于缺鈣以及骨量需要有顯著的療效。人的發(fā)聲器官主要是由喉頭、喉結和甲狀軟骨組成，這些器官又是有彈性蛋白質薄膜構成，變聲期的青少年保護好發(fā)聲器官的發(fā)育非常重要，尤其是喜歡聲樂的藝術少年，特別要注意在變聲期多吃富含膠原蛋白的食物和攝取膠原蛋白。小貼士
自制膠原蛋白面膜
使用膠原蛋白粉最好是“食用+外敷”，而且最好是選用純的（無復配物的）、魚的膠原蛋白，原因是魚膠原更接近人體膠原，并且魚的活化溫度低10℃左右，更適合做面膜！1個月就會感覺毛孔明顯收緊，而且臉上還很光滑，皮膚也比沒有吃以前更嫩一些！第一步：準備調制膠原蛋白面膜的小碗和面膜紙。第二步：先將一袋膠原蛋白粉倒入小碗中。
第三步：放入適量的水（牛奶也可），膠原蛋白粉正在主動溶解。
第四步：把面膜紙折疊一下放入小碗中，輕輕地壓一下，讓面膜紙完全浸濕即可。
第五步：靜置5-10分鐘，膠原蛋白粉已經(jīng)主動溶于水中。
第六步：拿起面膜紙敷于臉部，用剩下的膠原蛋白粉溶液輕拍臉部，讓面膜紙緊貼面部，過10-15分鐘取下面膜紙即可。
注：也可將膠原蛋白溶液直接刷在臉上，再將面膜紙浸濕敷臉。
蛋白表達方式篇二
pcv2是圓環(huán)病毒科(circoviridae)圓環(huán)病毒屬成員，為單股環(huán)狀負鏈無囊膜的dna病毒, 為已知的最小動物病毒之一，約17~ 20nm, 二十面體對稱。根據(jù)病毒的抗原性和基因組成不同，可分為2種基因型或稱血清型, 即pcv1型和pcv2型。pcv1無致病性。pcv2具有致病性，基因組全長1767bp或1768bp，包括11個讀碼框，其中orf2編碼病毒的主要結構蛋白)核衣殼蛋白(cap)，其n端包含一個由41個氨基酸殘基組成的的核定位信號(nuclear location signal，nls)，與pcv2在細胞核內定位有關。mahe和liu等分別在sf 9真核細胞及大腸桿菌中進行了pcv2cap蛋白的表達, 但cap蛋白的表達量較低。為了提高cap蛋白的表達量, 本實驗成功構建去除nls的重組質粒, 并對其進行表達、純化、鑒定。
1材料和方法
1.1pcv-581重組質粒的構建
1.1.1pcr擴增去除nls基因的pcv-581
1.1.1.1引物的設計與合成: 根據(jù)本實驗室保存毒株的測序結果, 用oligo6.0設計刪除核定位信號特異引物(由大連寶生物工程公司合成), 并引入限制性內切酶bamhi、hindiii(加下劃線表示)。上游引物: acaggatccatggcatcttcaacac;下游引物: gaaagcttt tcattaagggttaagt;產(chǎn)物長度581bp。
1.1.1.2pcv2核酸的提取: 取接種pcv2病毒的pk-15細胞懸液500ul, 常規(guī)方法提取, 最后加20ul滅菌去離子水溶解,-20度保存。
1.1.1.3pcr擴增: pcr的反應體系總體積25ul: 上、下游引物(10ulmol/l)各1.0ul，10×rcr buffer2.5ul、dntp3.0ul(2.5mm each)，提取的dna2.0ll,taq酶0.25ll(5u/ ll, takara), 去離
子水補到25ll。反應參數(shù)為: 95e , 5min;94e, 45
s;55.9e, 45s;72e, 45s;30個循環(huán);72e , 7min。
取5llpcr產(chǎn)物進行電泳分析(見圖1)。
1.1.1.4pcr擴增產(chǎn)物的酶切、回收: 醇沉淀pcr
擴增產(chǎn)物、酶切、回收。具體操作方法如下: pcr
產(chǎn)物補到100ll, 加入等體積異丙醇, 置-20e 靜
止過夜, 13 000r/ min離心15min棄上清, 加入
600ll75%乙醇, 7000r/min離心5min, 倒掉上清,晾干, 加入10ll滅菌去離子水溶解。將醇沉產(chǎn)物
進行bamhi酶切, 體系為20ll: 10@buffer k2ll,bamhi 1ll(15u/ ll , takara), 醇沉產(chǎn)物10ll,h2o7ll, 37e 酶切1h。將酶切產(chǎn)物繼續(xù)醇沉淀
(方法步驟同上)后進行hindiii(15u/ ll, takara)
單酶切, 酶切體系同上, 回收目的片段。
1.2pqe-pcv581重組質粒的構建和鑒定: 將載
體pqe-32(qiagen)質粒用bamhi 和hindiii雙
酶切, 做100ll 酶切體系: 10@ buffer k10ll,bamhi2ll, hindiii 2ll, pqe-32質粒70ll, h2o
16ll。37e 酶切2h15min, 用膠回收試劑盒回收
(tiangen, 操作按照說明書進行), 目的片段和載
體常規(guī)方法連接、轉化m15、篩選陽性重組質粒
pqe-pcv581。酶切鑒定(見圖2)。
1.3重組蛋白的誘導表達及純化
從含有氨芐抗性的瓊脂平板上挑取單個陽性
菌落接種到5ml氨芐抗性(100lg/ ml)的lb液體 培養(yǎng)基中, 37e 過夜振蕩培養(yǎng)、活化, 取過夜活化 的培養(yǎng)物按照的比例接種到5ml含氨芐抗性的液 體lb培養(yǎng)基, 37e 振蕩培養(yǎng), 培養(yǎng)至od600nm達 0.4-0.6, 然后加入iptg(takara)至終濃度為0.2mmol/ l、0.4mmol/ l、0.6mmol/ l、0.8mmol/ l、1.0mmol/l、1.2mmol/l繼續(xù)培養(yǎng), 分別在誘導前、誘 導1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h取樣, 取1ml菌液離心
蛋白表達方式篇三
沒有活性可能存在兩種原因：his tag影響了活性，嘗試切除his tag后再次測定酶活。如果目前載體上沒有酶切位點可以更換至有酶切位點的載體（例如pet28a n段his tag可以使用thrombin切除his tag）?；蛘咧匦聵嫿ū磉_載體，自己引入酶切位點。如果切除了標簽還是沒有活性那就是蛋白本身的問題了。有些真核蛋白即使上清表達也是沒有正確折疊的，或者沒有進行表達后修飾，沒有生物活性。這種情況就比較杯具了。
2樓說的包涵體，我覺得有可能，你的粗酶活性比較弱，產(chǎn)生包涵體之后就會更弱了。
當然到底是不是由于包涵體的原因，還得確定。
1.在n末端加入標簽
這一系列載體的n末端加有標簽，其中pqe-30、pqe-9帶有6×組氨酸標簽，pqe30系列中的三個載體的多克隆位點距離其實密碼子而個相差一個堿基，pqe-9則是在多克隆位點處的設計較簡單。pqe40則是帶有6×組氨酸二氫葉酸還原酶標簽（6×his-dhfr），對于比較難表達的蛋白以及蛋白太小容易被降解的蛋白可以利用這種標簽。它可以保證蛋白的穩(wěn)定性，同時不會對外源蛋白的免疫原性造成很大的影響，非常適合用于表位篩選。
2.在c末端加入標簽
在蛋白的c末端加入標簽的好處是顯而易見的：可以利用基因本身的atg作為起始密碼子，保證了蛋白天然的n末端，這對于一些醫(yī)藥用的重組蛋白是相當重要的；同時可以純化出那些完整表達的蛋白，一些在翻譯過程中容易造成“暫停”現(xiàn)象的蛋白就不用怕純化產(chǎn)物里含有不完整的產(chǎn)物。融合了6×組氨酸標簽的有pqe-60和pqe-70，融合了6×his-dhfr的有pqe-16。
蛋白表達方式篇一
一、膠原蛋白基礎知識
1、什么是膠原蛋白？
蛋白質是以氨基酸為基本單位構成的生物大分子，是生命的物質基礎，沒有蛋白質就沒有生命，機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。而膠原蛋白是人體內最多的一種蛋白質，占了人體蛋白質總和的30—40%。
2、什么是膠原蛋白多肽？
膠原蛋白是大分子蛋白質，其分子量在30萬以上，人體很難消化吸收。膠原蛋白多肽是分子量3000—20000左右的小分子蛋白，具有很好的生物功能性和較高的消化吸收性，吸收率可達95—100%，現(xiàn)在食品界所說的膠原蛋白其實都是指膠原蛋白多肽。
3、膠原蛋白對人體各部位的作用
皮膚——皮膚可分表皮、真皮及皮下組織三層，最外表為表皮，可防止外界異物入侵。由表皮外側往內，依次是角質層、透明層、顆粒層、有棘細胞層及基底細胞層等五層細部結構，由于基底細胞層會有老舊細胞向上層頂升，大約兩個星期左右到達最外層，所以角質層最后會成為污垢而剝落。皮下真皮組織的70％是膠原蛋白，皮膚有如一個大套子緊緊包住身體各處，表面積相當大，人體四肢活動時，皮膚中膠原蛋白發(fā)揮功能，使皮膚具有保護功能，又有適當彈性及堅硬度，所以膠原蛋白能夠保持皮膚象20歲時的緊致、柔嫩感。表皮的基底膜與真皮中的膠原蛋白緊密結合，真皮呈現(xiàn)波浪狀也使得表皮隨之起伏。手腳能自由彎曲，跳高時具有彈性，主要歸功于膠原蛋白。膠原蛋白在皮膚結構中是緊緊包住真皮層中的毛根皮脂腺以及細胞。皮膚老化后會失去彈性，主要也與膠原蛋白有關。
眼睛——角膜和結膜組織的主要成分是膠原蛋白，補充膠原蛋白能夠有效預防眼部疾病。頭發(fā)——頭發(fā)的健康關鍵在于頭發(fā)的基礎頭皮皮下組織的營養(yǎng)，位于真皮層膠原蛋白是表層及表皮附屬物的營養(yǎng)供應站，表皮附屬物主要是毛發(fā)與指甲，皮膚缺乏膠原蛋白，頭發(fā)就會干燥分叉。另外構成頭發(fā)的角蛋白與膠原蛋白結構極為相似，補充膠原蛋白能夠增強發(fā)質潤澤。
牙齒——牙齒主要成分之一的象牙質的18％和組成牙齦和牙根的組織成分大部分為膠原蛋白，平時口服補充膠原蛋白就能夠有效預防牙齦炎等牙齒、口腔疾病。
指甲——前面已經(jīng)提到位于真皮層膠原蛋白是表皮層及表皮附屬物的營養(yǎng)供應站，指甲是表皮附屬物，人體膠原蛋白流失，指甲容易斷裂、晦暗無光澤。
胸部——乳房主要由結締組織和脂肪組織構成，而挺拔豐滿的乳房很大程度上依靠結締組織的承托，膠原蛋白是結締組織的主要成分，在結締組織中膠原蛋白常與多糖蛋白相互交織成網(wǎng)狀結構，產(chǎn)生一定的機械強度，是承托人體曲線，體現(xiàn)挺拔體態(tài)的物質基礎。補充膠原蛋白，可以起到自然豐胸效果。
內臟器官——機體五臟六腑沒有不受膠原蛋白影響的，缺乏膠原蛋白會嚴重影響臟器健康甚至引發(fā)各種疾病，充分補充膠原蛋白可以協(xié)助內臟器官營養(yǎng)補充和運動，有效預防疾病。骨骼——骨骼中有機物的70%～80%是膠原蛋白，骨骼生成時，首先必須合成充足的膠原蛋白纖維來組成骨骼的框架。因此，有人稱膠原蛋白為骨骼中的骨骼。膠原蛋白的流失或缺乏會引起骨質疏松等疾病。筋腱——構成骨骼與肌肉相聯(lián)的筋腱的成分80％是膠原蛋白。缺乏膠原蛋白會因起筋腱與肌肉的衰弱。因此，補鈣應先補充膠原蛋白
關節(jié)——關節(jié)是骨與骨間的軟骨，軟骨的50％構成物質是膠原蛋白，人體由于膠原蛋白流失與缺乏而導致的關節(jié)病癥情況較多。
4、膠原蛋白適用人群 ※健康人群
※亞健康人群，如易疲勞，睡眠不好，記憶力減退，未老先衰的人群
※皮膚粗糙、多斑、起皺，彈性差、光澤度下降的人群
※骨質疏松、長期補鈣效果不明顯，需要增加骨酪韌性的人群
※患有關節(jié)炎、關節(jié)疼痛的人群
※腸胃不好，消化系統(tǒng)有疾病的人群
※身材偏瘦、曲線平坦、女人味不濃的女性
※身體弱小，不夠健壯的男性
※術后康復，需要補充營養(yǎng)的人群
二、膠原蛋白的美容作用
膠原蛋白是維持皮膚與肌肉彈性的主要成分。但隨著年齡增加，皮膚與肌肉中的水分會減少這是老化的開始。此時，膠原蛋白纖維開始變?yōu)榧毿?，彈性蛋白之彈性也會減低，原先真皮中膠原蛋白與彈性蛋白交互構成有規(guī)則的網(wǎng)目結構會逐漸崩解，最后導致皺紋的生成。所以補充膠原蛋白能使皮膚保持年輕，道理即在于此。在國外，對膠原蛋白在美容方面的作用已進行深入的研究。試驗證明：0．01％的膠原蛋白純溶液就有良好的抗各種輻射的作用，且能形成很好的保水層，能供給皮膚所需要的全部水分。膠原蛋白應用于美容中的功效總結起來有如下幾點
1、緊膚平皺的作用：
膠原蛋白通過表皮進入真皮層組織后，能迅速填補局部塌陷，改善松弛的皮膚，收緊皮膚，減少深皺紋、平復細紋?？s小毛孔，使皮膚緊繃且富有彈性。膠原蛋白使細胞變得豐滿，從而使肌膚充盈，保持肌膚彈性與潤澤，維持肌膚細膩光滑，皺紋舒展，呈現(xiàn)質感和透明感，有效防止老化。
2、保濕滋潤的作用：
膠原蛋白本身是一種由三條螺旋形肽鏈聚合構成的透明狀物質，這三種螺旋結構能牢牢的瑣住水分和營養(yǎng)，讓皮膚時刻保持豐潤、水嫩的狀態(tài)。膠原蛋白中還含有羥脯氨酸和絲氨酸，是天然的保濕因子，防止水分流失，維持皮膚彈性與活力。另外，因為膠原蛋白保水性及緊縮性的雙重作用，還可改善干性及油性肌膚的分泌狀態(tài)，調整皮膚表面的油脂平衡，使其逐漸趨于中性肌膚，毛孔緊縮細致。
3、恢復彈性的作用：
膠原蛋白進入人體后，經(jīng)過吸收，生成新生細胞與原細胞結合，填補凹陷部位，使皮膚恢復彈性、柔韌充盈。
4、修復組織的作用：
膠原蛋白進入人體后，逐漸生成新生組織與周圍正常皮膚共同協(xié)調，從而起到矯形作用，恢復正常外觀，同時也可減輕患者的生理痛苦。對擴大性痤瘡疤痕，皮內或皮下組織受損，上皮收縮，深度皺紋或者其他軟組織的缺損均有明顯的改善作用。
5、美白淡斑的作用：
膠原蛋白能使細胞粘接更緊密，阻止酪氨酸轉化為黑色素，不給黑色素、毒素藏身之地，令皮膚膚色白暫、色斑淡出。
6、減肥美體的作用
減肥需要燃燒脂肪（分解代謝），而膠原蛋白能使這種分解代謝過程增加和延長，燃燒更多的脂肪從而達到減肥的目的。并且膠原蛋白對細胞的修補機能會消耗大量熱能，這種機能會消耗大量熱能，這種機能必須在睡眠狀態(tài)下進行，因此服用膠原蛋白，睡覺就能減肥，輕松減肥的夢想變成了現(xiàn)實。由于這種減肥方法效果溫和持久（口服膠原蛋白后，熟睡無進食狀態(tài)下提高脂肪燃燒率 60% 左右），對于正在減肥的人，口服膠原蛋白不僅能夠加速脂肪燃燒，而且由于膠原蛋白能促進皮膚深層纖維組織的張力與彈性，使得減肥后的皮膚仍然具有彈性和光澤，防止出現(xiàn)皮膚松弛、下垂、脫水等常見的減肥并發(fā)癥。
7、豐胸健美乳房的作用
乳房的健美對女性至關重要。豐滿、堅挺的乳房不僅展示了女性的曲線形體美，更體現(xiàn)了女性的自信和自尊。
首先，隨著年齡的增長，乳房皮膚中膠原蛋白含量不斷減少，口服活性膠原蛋白在保養(yǎng)面部皮膚的同時，保養(yǎng)著全身皮膚，乳房上的皮膚也沒有被遺忘。經(jīng)服用膠原蛋白后，乳房上的皮膚得到養(yǎng)護，彈性增強、色澤改良。
第二，也是最重要的原因，補充膠原蛋白對整個乳房實體有營養(yǎng)保健的作用。組織學研究表明，乳房主要由結締組織和脂肪組織構成。而結締組織的主體就是膠原纖維組織。發(fā)育幼小的乳房補充活性膠原蛋白后，乳房則膨大隆起。老年松弛的乳房中脂肪比例大、膠原比例小、乳房則下垂、松懈。
其三，膠原纖維有繃緊乳房的作用?？诜z原蛋白的健胸作用不僅僅局限于增大乳房的體積，更重要的作用是能上提下垂的乳房及繃緊松弛的乳房。分析乳房的結構可以看到，年輕時，皮膚的致密結締組織纖維（由膠原纖維組成）將乳腺牢固懸系和固定在皮膚上，行使著系帶和“繩索”的功能，使乳房挺拔秀麗。隨著歲月流失，膠原纖維三螺旋變得松懈（就象老化的松緊帶一樣失去拉力），不能將乳房拉緊，造成了乳房扁平下垂。而服用膠原蛋白可以糾正乳房的這種衰老退化現(xiàn)象。
7、消除黑眼圈和眼袋的作用
黑眼圈現(xiàn)象是因為人的眼睛組織較為松弛，眼袋現(xiàn)象則是因為眼部皮膚下垂造成的。由于該部位的皮膚薄，組織結構一旦松弛，血液就會聚積，導致黑眼圈和眼袋的發(fā)生。膠原蛋白是結締組織的重要成分，給皮膚提供支撐力、張力，使皮膚緊實，從而改善黑眼圈和眼袋。
8、美發(fā)亮甲的作用
缺少膠原蛋白，頭發(fā)會干枯分叉，膠原蛋白能營養(yǎng)發(fā)絲，解決頭發(fā)分叉，讓頭發(fā)潤澤有彈性。軟潤指甲 滋養(yǎng)甲面 可改變指甲黯淡無光、發(fā)黃、斷裂和指甲色素沉淀等種種煩惱，膠原蛋白能使您的指甲表面不僅光滑亮麗，而且還能使指甲強韌不易斷裂。
9、美洋1800魚膠原蛋白的美容療效 ※服用1—4周
迅速補充缺失水分，皮膚濕潤度增加，皮屑減少；皮膚不再油膩、粗糙、干燥；皮膚比服用前略白，撫摸時明顯感覺柔滑滋潤?！?—8周
經(jīng)過第二個月的繼續(xù)修復和補充，全身皮膚都會變得水嫩亮白，色斑、皺紋、魚尾紋、痘印、黑眼圈、眼袋等開始淡化，皮膚鎖水能力加強，肌膚非常緊致，有彈性，皮膚亮白度平均提高2-6度。
※服用9——15周 三、四個月的服用過后，皮膚已輕松恢復到了年輕時的細膩、緊致，細紋、眼袋、黑斑、痘印、暗瘡基本消失，指甲表面也變的光滑亮麗，頭發(fā)柔順有光澤，整個人氣色大變，精神矍鑠、神采奕奕！
※服用16—22周
前期的效果將得到綜合鞏固和提升，皮膚抵抗外界刺激的能力和自我恢復能力顯著加強，皮膚如新生嬰兒般一塵不染，紅潤有光澤，嬌柔動人，指甲也富有彈性和韌性，乳房豐滿，骨骼強硬，走路腿腳有力。全身由內而外，從根本上徹底恢復到年輕時的狀態(tài)，魅力、自信、年輕的女人非你莫屬！
三、膠原蛋白的健康作用
膠原蛋白是由成纖維細胞合成的，但隨著人的年齡增長，以及自由基的大量產(chǎn)生，膠原蛋白結構也在發(fā)生變化并漸漸流失（正常人體每年會流失1%的膠原蛋白），導致體內的膠原蛋白含量和種類發(fā)生劣化。與此同時，成纖維細胞的合成能力下降，膠原蛋白的降解卻加快，直接導致可溶性膠原蛋白逐漸減少，細胞間具有很好儲水性的粘多糖也減少，結締組織彈性低下，皮膚就會失去彈性并變薄、老化。不僅僅如此，導致真皮的纖維斷裂、脂肪萎縮、汗腺及皮脂腺分泌減少，使皮膚變得干燥、皺紋增多、出現(xiàn)色斑等，這些現(xiàn)象都是“衰老”的表現(xiàn)！這種衰老現(xiàn)象不斷地隨著年齡的增長而加劇，直觀地表現(xiàn)為：
※ 面部出現(xiàn)皺紋和老人斑?！?皮膚發(fā)暗和失去光澤?！?皮膚粗糙和彈性變差?！?動脈血管硬化。
※ 眼球晶體出現(xiàn)老年性白內障、角膜透明度減小。※ 胳膊腿不靈活甚至關節(jié)疼痛等現(xiàn)象。
而膠原蛋白在人體的皮膚、骨質、肌腱以及其他結締組織中參與細胞的遷移、分化和增殖，具有有很強的生物活性和生物功能，是新陳代謝的促進劑，促進人體內膠原蛋白的合成，減緩生物組織衰老和功能減退。因此，膠原蛋白對于老年人、更年期婦女、運動過度者、骨折者或關節(jié)容易酸痛者提高生命健康質量尤為重要。
1、膠原蛋白和補鈣的關系
隨著醫(yī)學科學的進步，人們對于補鈣的認識也不斷深化。五六十年代醫(yī)學上提倡補鈣；七八十年代認識到維生素d3利于鈣的吸收，提倡曬太陽和補充d3；現(xiàn)在才明白，人體主要不是缺鈣而是特別需要補充膠原蛋白來吸附和固定鈣。
人體內的鈣，主要存儲在骨骼和牙齒里，少部分在血漿中（常說的血鈣）。骨鈣與血鈣處于互相調節(jié)的過程中。食物里的鈣經(jīng)消化由腸道吸收進入血液，血漿里的蛋白質（起作用的主要是基中的羥脯氨酸）把鈣運送到去由成骨細胞礦化后形成骨質、牙齒等組織。血漿里的鈣濃度過低的話，骨鈣會溶解出來補充到血液里。一般來說，血液中羥脯氨酸的含量是吸收鈣的一個重要指標。膠原蛋白中含有其它蛋白質無法比較的豐富的羥脯氨酸和羥賴氨酸，而羥脯氨酸不僅僅是將血漿中的鈣運送到骨細胞的運載工具，骨組織中的骨膠原羥基磷鈣的黏合劑，骨質就是羥基磷酸鈣與骨膠原的結合體。由此，我們明白一個道理：補鈣，應該是膠原蛋白的補充在先，其次才是鈣質的補充。只要人體能夠攝入足夠的膠原蛋白，并且膠原蛋白的代謝功能是正常的，就不必特意額外地攝取鈣。
2、膠原蛋白的降血糖作用
膠原蛋白中含有膠原蛋白多肽-鉻，小白鼠動物實驗發(fā)現(xiàn)膠原蛋白多肽 – 鉻（iii）螯合物對于糖尿病空腹血糖的降低、增加肝糖原的合成及葡萄糖激酶的活性、控制甘油三酯、膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇，提高高密度脂蛋白膽固醇水平有明顯的作用。結果表明這種膠原多肽-----鉻有降血糖、降血脂及抗應激的保健功能
3、膠原蛋白的降壓作用
三大現(xiàn)代疾?。悍逝?、高血壓和血液中高甘油三酯、高膽固醇，嚴重威脅人類生活質量。膠原蛋白中還有一定量的骨膠原九肽，九肽可以抑制造成高血壓的血管緊張素轉化酶（ace）活性，動物實驗也證明了它顯著降低高血壓大鼠的動脈血壓。食物中的膠原蛋白在體內消化過程中，也有可能會水解出這樣的九肽，具有抑制血管緊張素轉換酶活性的作用，可降低血甘油三脂和膽固醇，從而降低血壓。膠原蛋白還對血管內皮細胞具有明顯的促進增殖作用，即對血管損傷有一定的保護和修復作用。因此，有利于降低體重和血脂，適用于超重病人和動脈硬化的病人。
4、膠原蛋白抑制癌細胞的作用
癌細胞的增殖和轉移是兩種不同的表現(xiàn)形式。
首先是癌細胞的增殖，癌腫瘤是一個充滿毛細血管的血包，癌細胞為了獲取大量的營養(yǎng)成分，就要瘋狂地分泌出血管形成因子taf來使毛細血管急速增加，因為毛細血管是癌細胞獲取營養(yǎng)成分的通道。
其次是癌細胞的轉移。當癌細胞要轉移到別的臟器時，首先要往該器官深處移動，以獲得更好的發(fā)展環(huán)境。任何器官表面都有膠原蛋白構成的基底膜保護著。所以癌細胞就必須要穿透該處的膠原蛋白構成的基底膜組織進入該器官，并且必須到達有血管的部位。然后，癌細胞再進一步穿透血管（血管的中間層就是膠原蛋白構成的），進入該血管并隨著血管內血液循環(huán)，以便快速移動擴散到其他部位。
事物總是矛盾的，癌細胞要增殖和轉移，機體內就有抑制癌細胞增殖和控制癌細胞轉移的機制。
首先，每個單獨的細胞外面被細胞外基質（主要是膠原蛋白）包裹著，細胞與細胞之間的連接也是靠細胞外基質粘連起來的，細胞外基質在腫瘤形成中起著關鍵的作用。因為癌腫瘤的表面被膠原纖維包裹著，膠原纖維的作用之一就是抑制癌細胞的生長和轉移。任何健康的人每天都有至少數(shù)以千計的癌細胞產(chǎn)生，甚至許多人至死都是癌腫瘤攜帶者。為什么有人發(fā)病成為癌癥患者，而有些人就沒有呢?有的癌患者就可以控制住癌細胞的增殖和轉移，而有的患者就控制不住。實際上，包裹在癌細胞外側的膠原蛋白就是“防衛(wèi)軍”，無時無刻地與癌細胞在進行卓絕的“攻守之戰(zhàn)”。身體有足夠的膠原蛋白的話，膠原纖維就會把癌細胞緊緊地包裹，使其不能任意增殖擴散。當人體缺乏膠原蛋白的時候，癌細胞突破這一防線就開始肆虐增殖和轉移。
另外，當人體的免疫蛋白與膠原蛋白結合，巨噬細胞、淋巴細胞、血漿細胞及免疫球蛋白等免疫機能就會總體性提高，可以吞噬癌細胞。
膠原纖維還能約束息肉增生和良性瘤的擴大。尤其當患有這些疾病的時候，由于身體需要大量的膠原蛋白，而人體自我合成速度又不足以滿足身體需要的話，就必須通過食物補充膠原蛋白。通過食物還不能有效補充膠原蛋白的話，身體就只好“東拆西借”----分解身體其它部位的膠原組織向病灶供給。所以，我們常常看到末期癌癥患者身體消瘦、骨架縮小就是這個緣故。
尤其，癌癥患者接受的化療、放療、電療等療法，在消滅癌細胞的同時，敵我不分地將包裹在腫瘤外層的膠原纖維也分解摧毀了。而腫瘤一旦暴露后，失去膠原纖維的束縛，更加加速了癌細胞的擴散速度。因此，癌癥患者更需要補充膠原蛋白加強輔助治療
5、膠原蛋白與免疫機能
人體的免疫力的高低因人而異，原因很多。但是，基本原因是免疫球蛋白、淋巴球與巨噬細胞等免疫細胞在發(fā)現(xiàn)外來異物侵入機體時，會將異物包圍吞噬，甚至自我犧牲以保護身體。所以，免疫細胞越多越強壯，身體免疫力越高。
研究表明，膠原蛋白與免疫蛋白相結合就可以有效地增強人體免疫系統(tǒng)的免疫力。
當免疫細胞隨血液流經(jīng)身體各處時，會透過血管壁，接近外來的異物（如細菌、病毒等），若這一部位膠原蛋白含量豐富的話，免疫細胞就與膠原蛋白有機結合起來，共同對抗入侵異物。這一生物活動一旦發(fā)生，身體就像接到全體總動員令一樣，一連串的免疫機能都被激活，巨噬細胞、淋巴球、血漿細胞及免疫球蛋白等免疫機能就會提高，人體抵抗力也就增強了。
6、膠原蛋白與兒童和青少年發(fā)育
影響兒童和青少年發(fā)育的因素，除了遺傳因素（占40~50%），營養(yǎng)因素是最重要的。營養(yǎng)因素中，蛋白質的影響最為直接。過去，日本人的身高不如中國人，而最新的統(tǒng)計結果，我國7歲男女兒童的平均身高分別比日本同齡兒童低0.6厘米和0.5厘米，15~18歲男女青少年分別平均比日本同齡者矮1.4厘米和0.6厘米。拔除掉遺傳因素外，無疑與營養(yǎng)素攝入多少有直接關系。
人體中的礦物質約占體重的5%，其中的鈣約占體重的2%。鈣的總量的99%。分頁在骨骼和牙齒中，其余1%分頁在血液、細胞間液及軟組織中。人在20歲之前是骨骼的生長階段，有兩個生長高峰期：第一個高峰1歲以前，如果發(fā)育遲緩就會出牙晚、學步晚、雞胸。第二個高峰是12~14歲，如果發(fā)育遲緩就會身材矮小、生長痛等。
動物實驗發(fā)現(xiàn)，給幼馬飲料中添加膠原蛋白，通過對關節(jié)間隙的測定結果表明，與對照組相比較，幼馬的軟骨生長茁壯、鬃毛稠密，體高47%，馬蹄生長37%。這說明，生物體發(fā)育期對于骨質發(fā)育的需求。膠原蛋白是治療缺鈣癥的激活劑，對彌補動物的幼年期、青春期對于缺鈣以及骨量需要有顯著的療效。人的發(fā)聲器官主要是由喉頭、喉結和甲狀軟骨組成，這些器官又是有彈性蛋白質薄膜構成，變聲期的青少年保護好發(fā)聲器官的發(fā)育非常重要，尤其是喜歡聲樂的藝術少年，特別要注意在變聲期多吃富含膠原蛋白的食物和攝取膠原蛋白。小貼士
自制膠原蛋白面膜
使用膠原蛋白粉最好是“食用+外敷”，而且最好是選用純的（無復配物的）、魚的膠原蛋白，原因是魚膠原更接近人體膠原，并且魚的活化溫度低10℃左右，更適合做面膜！1個月就會感覺毛孔明顯收緊，而且臉上還很光滑，皮膚也比沒有吃以前更嫩一些！第一步：準備調制膠原蛋白面膜的小碗和面膜紙。第二步：先將一袋膠原蛋白粉倒入小碗中。
第三步：放入適量的水（牛奶也可），膠原蛋白粉正在主動溶解。
第四步：把面膜紙折疊一下放入小碗中，輕輕地壓一下，讓面膜紙完全浸濕即可。
第五步：靜置5-10分鐘，膠原蛋白粉已經(jīng)主動溶于水中。
第六步：拿起面膜紙敷于臉部，用剩下的膠原蛋白粉溶液輕拍臉部，讓面膜紙緊貼面部，過10-15分鐘取下面膜紙即可。
注：也可將膠原蛋白溶液直接刷在臉上，再將面膜紙浸濕敷臉。
蛋白表達方式篇二
pcv2是圓環(huán)病毒科(circoviridae)圓環(huán)病毒屬成員，為單股環(huán)狀負鏈無囊膜的dna病毒, 為已知的最小動物病毒之一，約17~ 20nm, 二十面體對稱。根據(jù)病毒的抗原性和基因組成不同，可分為2種基因型或稱血清型, 即pcv1型和pcv2型。pcv1無致病性。pcv2具有致病性，基因組全長1767bp或1768bp，包括11個讀碼框，其中orf2編碼病毒的主要結構蛋白)核衣殼蛋白(cap)，其n端包含一個由41個氨基酸殘基組成的的核定位信號(nuclear location signal，nls)，與pcv2在細胞核內定位有關。mahe和liu等分別在sf 9真核細胞及大腸桿菌中進行了pcv2cap蛋白的表達, 但cap蛋白的表達量較低。為了提高cap蛋白的表達量, 本實驗成功構建去除nls的重組質粒, 并對其進行表達、純化、鑒定。
1材料和方法
1.1pcv-581重組質粒的構建
1.1.1pcr擴增去除nls基因的pcv-581
1.1.1.1引物的設計與合成: 根據(jù)本實驗室保存毒株的測序結果, 用oligo6.0設計刪除核定位信號特異引物(由大連寶生物工程公司合成), 并引入限制性內切酶bamhi、hindiii(加下劃線表示)。上游引物: acaggatccatggcatcttcaacac;下游引物: gaaagcttt tcattaagggttaagt;產(chǎn)物長度581bp。
1.1.1.2pcv2核酸的提取: 取接種pcv2病毒的pk-15細胞懸液500ul, 常規(guī)方法提取, 最后加20ul滅菌去離子水溶解,-20度保存。
1.1.1.3pcr擴增: pcr的反應體系總體積25ul: 上、下游引物(10ulmol/l)各1.0ul，10×rcr buffer2.5ul、dntp3.0ul(2.5mm each)，提取的dna2.0ll,taq酶0.25ll(5u/ ll, takara), 去離
子水補到25ll。反應參數(shù)為: 95e , 5min;94e, 45
s;55.9e, 45s;72e, 45s;30個循環(huán);72e , 7min。
取5llpcr產(chǎn)物進行電泳分析(見圖1)。
1.1.1.4pcr擴增產(chǎn)物的酶切、回收: 醇沉淀pcr
擴增產(chǎn)物、酶切、回收。具體操作方法如下: pcr
產(chǎn)物補到100ll, 加入等體積異丙醇, 置-20e 靜
止過夜, 13 000r/ min離心15min棄上清, 加入
600ll75%乙醇, 7000r/min離心5min, 倒掉上清,晾干, 加入10ll滅菌去離子水溶解。將醇沉產(chǎn)物
進行bamhi酶切, 體系為20ll: 10@buffer k2ll,bamhi 1ll(15u/ ll , takara), 醇沉產(chǎn)物10ll,h2o7ll, 37e 酶切1h。將酶切產(chǎn)物繼續(xù)醇沉淀
(方法步驟同上)后進行hindiii(15u/ ll, takara)
單酶切, 酶切體系同上, 回收目的片段。
1.2pqe-pcv581重組質粒的構建和鑒定: 將載
體pqe-32(qiagen)質粒用bamhi 和hindiii雙
酶切, 做100ll 酶切體系: 10@ buffer k10ll,bamhi2ll, hindiii 2ll, pqe-32質粒70ll, h2o
16ll。37e 酶切2h15min, 用膠回收試劑盒回收
(tiangen, 操作按照說明書進行), 目的片段和載
體常規(guī)方法連接、轉化m15、篩選陽性重組質粒
pqe-pcv581。酶切鑒定(見圖2)。
1.3重組蛋白的誘導表達及純化
從含有氨芐抗性的瓊脂平板上挑取單個陽性
菌落接種到5ml氨芐抗性(100lg/ ml)的lb液體 培養(yǎng)基中, 37e 過夜振蕩培養(yǎng)、活化, 取過夜活化 的培養(yǎng)物按照的比例接種到5ml含氨芐抗性的液 體lb培養(yǎng)基, 37e 振蕩培養(yǎng), 培養(yǎng)至od600nm達 0.4-0.6, 然后加入iptg(takara)至終濃度為0.2mmol/ l、0.4mmol/ l、0.6mmol/ l、0.8mmol/ l、1.0mmol/l、1.2mmol/l繼續(xù)培養(yǎng), 分別在誘導前、誘 導1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h取樣, 取1ml菌液離心
蛋白表達方式篇三
沒有活性可能存在兩種原因：his tag影響了活性，嘗試切除his tag后再次測定酶活。如果目前載體上沒有酶切位點可以更換至有酶切位點的載體（例如pet28a n段his tag可以使用thrombin切除his tag）?；蛘咧匦聵嫿ū磉_載體，自己引入酶切位點。如果切除了標簽還是沒有活性那就是蛋白本身的問題了。有些真核蛋白即使上清表達也是沒有正確折疊的，或者沒有進行表達后修飾，沒有生物活性。這種情況就比較杯具了。
2樓說的包涵體，我覺得有可能，你的粗酶活性比較弱，產(chǎn)生包涵體之后就會更弱了。
當然到底是不是由于包涵體的原因，還得確定。
1.在n末端加入標簽
這一系列載體的n末端加有標簽，其中pqe-30、pqe-9帶有6×組氨酸標簽，pqe30系列中的三個載體的多克隆位點距離其實密碼子而個相差一個堿基，pqe-9則是在多克隆位點處的設計較簡單。pqe40則是帶有6×組氨酸二氫葉酸還原酶標簽（6×his-dhfr），對于比較難表達的蛋白以及蛋白太小容易被降解的蛋白可以利用這種標簽。它可以保證蛋白的穩(wěn)定性，同時不會對外源蛋白的免疫原性造成很大的影響，非常適合用于表位篩選。
2.在c末端加入標簽
在蛋白的c末端加入標簽的好處是顯而易見的：可以利用基因本身的atg作為起始密碼子，保證了蛋白天然的n末端，這對于一些醫(yī)藥用的重組蛋白是相當重要的；同時可以純化出那些完整表達的蛋白，一些在翻譯過程中容易造成“暫停”現(xiàn)象的蛋白就不用怕純化產(chǎn)物里含有不完整的產(chǎn)物。融合了6×組氨酸標簽的有pqe-60和pqe-70，融合了6×his-dhfr的有pqe-16。