某些物質受紫外光或可見光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長較長的熒光。物質的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質的定性分析。當激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質在一定濃度范圍內，其發(fā)射光強度與溶液中該物質的濃度成正比關系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，以及由于在液面附近溶液會吸收激發(fā)光，使發(fā)射光強度下降，導致發(fā)射光強度與濃度不成正比，故熒光分析法應在低濃度溶液中進行。
所用的儀器為熒光計或熒光分光光度計，按各藥品項下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對照品溶液和供試品溶液。
由于不易測定絕對熒光強度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對照品溶液測得濃度的線性范圍后，再在每次測定前，用一定濃度的對照品溶液校定儀器的靈敏度；然后在相同的條件下，讀取對照品溶液及其試劑空白與供試品溶液及其試劑空白的讀數，用下式計算供試品濃度：
R<[i]>-R<[ib]>
C<[i]>＝──────×C<[r]>
R<[r]>－R<[rb]>
式中
C<[i]>為供試品溶液的濃度；
C<[r]>為對照品溶液的濃度；
R<[i]>為供試品溶液的讀數；
R<[ib]>為供試品溶液試劑空白的讀數；
R<[r]>為對照品溶液的讀數；
R<[rb]>為對照品溶液試劑空白的讀數。
因熒光分析法中的濃度與讀數的線性較窄，故（R<[i]>－R<[ib]>）/（R<[r]>－R<[rb]>）應為0.50～2.0；如有超過，應在調節(jié)溶液濃度后再測。
對易被光分解的品種 ，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與之近似而對光穩(wěn)定的物質溶液，例如藍色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等，先與對照品溶液比較測定其讀數關系，并在測定供試品溶液時用以代替對照品溶液，以校定儀器的靈敏度。
熒光分析法因靈敏度高，故干擾因素也多。溶劑不純會帶入較大誤差，應先作空白檢查，必要時，應用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。溶液中的懸浮物對光有散射作用，必要時，應用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。所用的玻璃儀器與測定池等也必須保持高度潔凈。溫度對熒光強度有較大的影響，測定時應控制溫度一致。溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時可在測定前通入惰性氣體除氧。
所用的儀器為熒光計或熒光分光光度計，按各藥品項下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對照品溶液和供試品溶液。
由于不易測定絕對熒光強度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對照品溶液測得濃度的線性范圍后，再在每次測定前，用一定濃度的對照品溶液校定儀器的靈敏度；然后在相同的條件下，讀取對照品溶液及其試劑空白與供試品溶液及其試劑空白的讀數，用下式計算供試品濃度：
R<[i]>-R<[ib]>
C<[i]>＝──────×C<[r]>
R<[r]>－R<[rb]>
式中
C<[i]>為供試品溶液的濃度；
C<[r]>為對照品溶液的濃度；
R<[i]>為供試品溶液的讀數；
R<[ib]>為供試品溶液試劑空白的讀數；
R<[r]>為對照品溶液的讀數；
R<[rb]>為對照品溶液試劑空白的讀數。
因熒光分析法中的濃度與讀數的線性較窄，故（R<[i]>－R<[ib]>）/（R<[r]>－R<[rb]>）應為0.50～2.0；如有超過，應在調節(jié)溶液濃度后再測。
對易被光分解的品種 ，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與之近似而對光穩(wěn)定的物質溶液，例如藍色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等，先與對照品溶液比較測定其讀數關系，并在測定供試品溶液時用以代替對照品溶液，以校定儀器的靈敏度。
熒光分析法因靈敏度高，故干擾因素也多。溶劑不純會帶入較大誤差，應先作空白檢查，必要時，應用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。溶液中的懸浮物對光有散射作用，必要時，應用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。所用的玻璃儀器與測定池等也必須保持高度潔凈。溫度對熒光強度有較大的影響，測定時應控制溫度一致。溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時可在測定前通入惰性氣體除氧。