某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長較長的熒光。物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會(huì)有“自熄滅”作用，以及由于在液面附近溶液會(huì)吸收激發(fā)光，使發(fā)射光強(qiáng)度下降，導(dǎo)致發(fā)射光強(qiáng)度與濃度不成正比，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。
所用的儀器為熒光計(jì)或熒光分光光度計(jì)，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對(duì)照品溶液和供試品溶液。
由于不易測(cè)定絕對(duì)熒光強(qiáng)度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對(duì)照品溶液測(cè)得濃度的線性范圍后，再在每次測(cè)定前，用一定濃度的對(duì)照品溶液校定儀器的靈敏度；然后在相同的條件下，讀取對(duì)照品溶液及其試劑空白與供試品溶液及其試劑空白的讀數(shù)，用下式計(jì)算供試品濃度：
R<[i]>-R<[ib]>
C<[i]>＝──────×C<[r]>
R<[r]>－R<[rb]>
式中
C<[i]>為供試品溶液的濃度；
C<[r]>為對(duì)照品溶液的濃度；
R<[i]>為供試品溶液的讀數(shù)；
R<[ib]>為供試品溶液試劑空白的讀數(shù)；
R<[r]>為對(duì)照品溶液的讀數(shù)；
R<[rb]>為對(duì)照品溶液試劑空白的讀數(shù)。
因熒光分析法中的濃度與讀數(shù)的線性較窄，故（R<[i]>－R<[ib]>）/（R<[r]>－R<[rb]>）應(yīng)為0.50～2.0；如有超過，應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再測(cè)。
對(duì)易被光分解的品種 ，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與之近似而對(duì)光穩(wěn)定的物質(zhì)溶液，例如藍(lán)色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等，先與對(duì)照品溶液比較測(cè)定其讀數(shù)關(guān)系，并在測(cè)定供試品溶液時(shí)用以代替對(duì)照品溶液，以校定儀器的靈敏度。
熒光分析法因靈敏度高，故干擾因素也多。溶劑不純會(huì)帶入較大誤差，應(yīng)先作空白檢查，必要時(shí)，應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。溶液中的懸浮物對(duì)光有散射作用，必要時(shí)，應(yīng)用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。所用的玻璃儀器與測(cè)定池等也必須保持高度潔凈。溫度對(duì)熒光強(qiáng)度有較大的影響，測(cè)定時(shí)應(yīng)控制溫度一致。溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時(shí)可在測(cè)定前通入惰性氣體除氧。
所用的儀器為熒光計(jì)或熒光分光光度計(jì)，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對(duì)照品溶液和供試品溶液。
由于不易測(cè)定絕對(duì)熒光強(qiáng)度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對(duì)照品溶液測(cè)得濃度的線性范圍后，再在每次測(cè)定前，用一定濃度的對(duì)照品溶液校定儀器的靈敏度；然后在相同的條件下，讀取對(duì)照品溶液及其試劑空白與供試品溶液及其試劑空白的讀數(shù)，用下式計(jì)算供試品濃度：
R<[i]>-R<[ib]>
C<[i]>＝──────×C<[r]>
R<[r]>－R<[rb]>
式中
C<[i]>為供試品溶液的濃度；
C<[r]>為對(duì)照品溶液的濃度；
R<[i]>為供試品溶液的讀數(shù)；
R<[ib]>為供試品溶液試劑空白的讀數(shù)；
R<[r]>為對(duì)照品溶液的讀數(shù)；
R<[rb]>為對(duì)照品溶液試劑空白的讀數(shù)。
因熒光分析法中的濃度與讀數(shù)的線性較窄，故（R<[i]>－R<[ib]>）/（R<[r]>－R<[rb]>）應(yīng)為0.50～2.0；如有超過，應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再測(cè)。
對(duì)易被光分解的品種 ，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與之近似而對(duì)光穩(wěn)定的物質(zhì)溶液，例如藍(lán)色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等，先與對(duì)照品溶液比較測(cè)定其讀數(shù)關(guān)系，并在測(cè)定供試品溶液時(shí)用以代替對(duì)照品溶液，以校定儀器的靈敏度。
熒光分析法因靈敏度高，故干擾因素也多。溶劑不純會(huì)帶入較大誤差，應(yīng)先作空白檢查，必要時(shí)，應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。溶液中的懸浮物對(duì)光有散射作用，必要時(shí)，應(yīng)用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。所用的玻璃儀器與測(cè)定池等也必須保持高度潔凈。溫度對(duì)熒光強(qiáng)度有較大的影響，測(cè)定時(shí)應(yīng)控制溫度一致。溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時(shí)可在測(cè)定前通入惰性氣體除氧。