【關(guān)鍵詞】 子宮內(nèi)膜異位癥；，孕激素；，孕激素酮
摘要： 目的 探討卵巢子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）病灶對生理狀態(tài)的孕激素水平反應(yīng)不良是否由局部孕激素受體亞型分布及數(shù)量改變或功能缺陷所致。方法 采用RTPCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法，檢測45例EMS患者的卵巢異位子宮內(nèi)膜（卵巢EMS組）和在位內(nèi)膜（在位內(nèi)膜組）及35例其他患者的正常子宮內(nèi)膜（對照組）的孕激素受體PR（A+B）、孕激素受體亞型A、B（PRA、PRB）mRNA及其蛋白的表達(dá)。 結(jié)果（1）對照組和在位內(nèi)膜組的PR表達(dá)在增生期增強(qiáng)，并隨分泌期逐漸減弱；PRA占優(yōu)勢，PRB/PRA比值在整個月經(jīng)周期保持相對恒定。（2）卵巢EMS組PRA、PRB、PR（A+B）表達(dá)絕對低于對照組（P<0.01），無周期性變化。異位內(nèi)膜腺上皮PRA表達(dá)呈絕對降低，而間質(zhì)中PRB表達(dá)相對增高，PRA不占優(yōu)勢，PRB/PR（A+B）顯著增高（P<0.01）。結(jié)論異位子宮內(nèi)膜存在局部孕激素受體亞型數(shù)量和比值改變，可能是子宮內(nèi)膜異位癥孕激素抵抗現(xiàn)象的主要分子機(jī)制。
關(guān)鍵詞： 子宮內(nèi)膜異位癥； 孕激素； 孕激素酮
Expression of Progesterone Subtype Receptors and Local Progesterone Resistance in Human Ovarian Endometriosis
Qu Junying， Ou Xianghong， Yang Daixing， Zhang Sheng， Lin Jing‘a(chǎn)n3， Ma Yanhui
1.Department of Obstetrics and Gynecology， The Affiliated First Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China
2.Department of Reproductive Center， Chenzhou People‘`s Hospital， Chenzhou 423000， China
3.Department of Pathology， The Affiliated First Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China
ABSTRACT： Objective To study the expression and distribution of progesterone subtype receptors（PR） in ovarian endometriosis.Methods The levels of PR（A+B） were assessed by RTPCR and PR（A+B） protein were detected by immunohistochemical assay in 45 ovarian endometriosis and their eutopic endometrium and 35 normal endometrium during the same menstrual cycle. Results PR expression was gradually increased during proliferative phase in the normal endometrium and eutopic endometrium， but gradually decreased along with the secretary phase.PRA was dominant during the menstualmenstrual cycle.However， the ratio PRB/PRA was maintained relatively constant. Compared with the normal endometrium， the expression of PRB and PR（A＋B） mRNA were lower（P<0.01） in ovarian endometriosis and showed no periodic variation during the menstrual cycle. In endometriotic gland epithelial cells， PRA protein was decreased absolutely， whereas in the stroma cell PRB expression was relatively increased and the ratio PRB/PR（A+B） was very significantly higher than that in normal endometrium（P<0.01）。 Conclusion A wide variety of concentrations of the PRB/PRA ratios in the endometriotic tissue might be considered as one of the molecular mechanisms of the progesterone resistance in endometriosis.
KEY WORDS： endometriosis； progestin； progesterone
子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）是一種雌激素依賴性疾病，已有研究發(fā)現(xiàn)，盡管EMS患者的血清孕激素濃度與正常婦女相同，但腹腔液中孕激素（P）的水平卻是后者的3~4倍[1].臨床病理發(fā)現(xiàn)，異位腺上皮多數(shù)保持增生狀態(tài)，黃體期分泌反應(yīng)差甚至無反應(yīng)[2].Metzger報告用大劑量的孕激素治療1例EMS患者無效，術(shù)后病理報告異位內(nèi)膜增生活躍，免疫組織化學(xué)提示雌激素受體（ER）陰性，而孕激素受體（PR）陽性[3].Zong認(rèn)為這種孕激素抵抗現(xiàn)象可能是由于缺乏足夠有功能的PR基因[4].筆者設(shè)想，可能由于孕激素受體亞型改變，導(dǎo)致孕激素作用缺陷和局部雌激素代謝異常，特研究異位子宮內(nèi)膜孕激素受體亞型的表達(dá)及與該現(xiàn)象有關(guān)的分子機(jī)制，報告如下。
1 對象與方法
1.1 對象
卵巢EMS患者為2003年11月~2004年12月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及福建省婦幼保健院行腹腔鏡或開腹手術(shù)獲取的卵巢異位子宮內(nèi)膜，共45例（卵巢EMS組），其中35例同時刮取子宮前、后壁內(nèi)膜組織各1條（在位內(nèi)膜組）。同法另取35例未經(jīng)放、化療治療的宮頸癌Ⅰa~Ⅱa患者的子宮標(biāo)本內(nèi)膜，以其代表正常子宮內(nèi)膜（對照組）。所有入選病例均為已婚，術(shù)前未用任何激素類藥物治療，無內(nèi)科合并癥，有正常月經(jīng)周期（26~31 d），年齡（29±5）歲（23~40歲）。
實驗前將卵巢異位子宮內(nèi)膜標(biāo)本行HE染色，光鏡下可見子宮內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞者入選卵巢EMS組。在位內(nèi)膜組和對照組子宮內(nèi)膜月經(jīng)期根據(jù)其月經(jīng)周期推算，并符合Noye‘s分期病理學(xué)圖像[5].
1.2 材料
1.2.1 引物
由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成，序列為：PR（A＋B）上游（1950~1967 bp）：5‘AGC CGG TCC GCG TCC AAG3’下游（2174~2191 bp）：5‘CCA CCC AGA GCC CGA GGG3 PRB上游（4~24 bp）：5’ACT GAG CTG AAG GCA AAG GGT3下游（186~204 bp）：5‘GTC CTG TCC CTG GCA GGG C3’PR（A＋B）和PRB目的基因片斷分別為242和201 bp.βactin（內(nèi)參基因）引物序列： 上游：5‘GGC ATG GGT CAG AAG GAT TCC3’ 下游：5‘ATG TCA CGC CAC GAT TTC CCG C3’管家基因片斷500 bp.以上引物均參照說明書用焦碳酸二乙醇（DEPC）水溶解，終濃度為1 pmol/μL
摘要： 目的 探討卵巢子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）病灶對生理狀態(tài)的孕激素水平反應(yīng)不良是否由局部孕激素受體亞型分布及數(shù)量改變或功能缺陷所致。方法 采用RTPCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法，檢測45例EMS患者的卵巢異位子宮內(nèi)膜（卵巢EMS組）和在位內(nèi)膜（在位內(nèi)膜組）及35例其他患者的正常子宮內(nèi)膜（對照組）的孕激素受體PR（A+B）、孕激素受體亞型A、B（PRA、PRB）mRNA及其蛋白的表達(dá)。 結(jié)果（1）對照組和在位內(nèi)膜組的PR表達(dá)在增生期增強(qiáng)，并隨分泌期逐漸減弱；PRA占優(yōu)勢，PRB/PRA比值在整個月經(jīng)周期保持相對恒定。（2）卵巢EMS組PRA、PRB、PR（A+B）表達(dá)絕對低于對照組（P<0.01），無周期性變化。異位內(nèi)膜腺上皮PRA表達(dá)呈絕對降低，而間質(zhì)中PRB表達(dá)相對增高，PRA不占優(yōu)勢，PRB/PR（A+B）顯著增高（P<0.01）。結(jié)論異位子宮內(nèi)膜存在局部孕激素受體亞型數(shù)量和比值改變，可能是子宮內(nèi)膜異位癥孕激素抵抗現(xiàn)象的主要分子機(jī)制。
關(guān)鍵詞： 子宮內(nèi)膜異位癥； 孕激素； 孕激素酮
Expression of Progesterone Subtype Receptors and Local Progesterone Resistance in Human Ovarian Endometriosis
Qu Junying， Ou Xianghong， Yang Daixing， Zhang Sheng， Lin Jing‘a(chǎn)n3， Ma Yanhui
1.Department of Obstetrics and Gynecology， The Affiliated First Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China
2.Department of Reproductive Center， Chenzhou People‘`s Hospital， Chenzhou 423000， China
3.Department of Pathology， The Affiliated First Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China
ABSTRACT： Objective To study the expression and distribution of progesterone subtype receptors（PR） in ovarian endometriosis.Methods The levels of PR（A+B） were assessed by RTPCR and PR（A+B） protein were detected by immunohistochemical assay in 45 ovarian endometriosis and their eutopic endometrium and 35 normal endometrium during the same menstrual cycle. Results PR expression was gradually increased during proliferative phase in the normal endometrium and eutopic endometrium， but gradually decreased along with the secretary phase.PRA was dominant during the menstualmenstrual cycle.However， the ratio PRB/PRA was maintained relatively constant. Compared with the normal endometrium， the expression of PRB and PR（A＋B） mRNA were lower（P<0.01） in ovarian endometriosis and showed no periodic variation during the menstrual cycle. In endometriotic gland epithelial cells， PRA protein was decreased absolutely， whereas in the stroma cell PRB expression was relatively increased and the ratio PRB/PR（A+B） was very significantly higher than that in normal endometrium（P<0.01）。 Conclusion A wide variety of concentrations of the PRB/PRA ratios in the endometriotic tissue might be considered as one of the molecular mechanisms of the progesterone resistance in endometriosis.
KEY WORDS： endometriosis； progestin； progesterone
子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）是一種雌激素依賴性疾病，已有研究發(fā)現(xiàn)，盡管EMS患者的血清孕激素濃度與正常婦女相同，但腹腔液中孕激素（P）的水平卻是后者的3~4倍[1].臨床病理發(fā)現(xiàn)，異位腺上皮多數(shù)保持增生狀態(tài)，黃體期分泌反應(yīng)差甚至無反應(yīng)[2].Metzger報告用大劑量的孕激素治療1例EMS患者無效，術(shù)后病理報告異位內(nèi)膜增生活躍，免疫組織化學(xué)提示雌激素受體（ER）陰性，而孕激素受體（PR）陽性[3].Zong認(rèn)為這種孕激素抵抗現(xiàn)象可能是由于缺乏足夠有功能的PR基因[4].筆者設(shè)想，可能由于孕激素受體亞型改變，導(dǎo)致孕激素作用缺陷和局部雌激素代謝異常，特研究異位子宮內(nèi)膜孕激素受體亞型的表達(dá)及與該現(xiàn)象有關(guān)的分子機(jī)制，報告如下。
1 對象與方法
1.1 對象
卵巢EMS患者為2003年11月~2004年12月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及福建省婦幼保健院行腹腔鏡或開腹手術(shù)獲取的卵巢異位子宮內(nèi)膜，共45例（卵巢EMS組），其中35例同時刮取子宮前、后壁內(nèi)膜組織各1條（在位內(nèi)膜組）。同法另取35例未經(jīng)放、化療治療的宮頸癌Ⅰa~Ⅱa患者的子宮標(biāo)本內(nèi)膜，以其代表正常子宮內(nèi)膜（對照組）。所有入選病例均為已婚，術(shù)前未用任何激素類藥物治療，無內(nèi)科合并癥，有正常月經(jīng)周期（26~31 d），年齡（29±5）歲（23~40歲）。
實驗前將卵巢異位子宮內(nèi)膜標(biāo)本行HE染色，光鏡下可見子宮內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞者入選卵巢EMS組。在位內(nèi)膜組和對照組子宮內(nèi)膜月經(jīng)期根據(jù)其月經(jīng)周期推算，并符合Noye‘s分期病理學(xué)圖像[5].
1.2 材料
1.2.1 引物
由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成，序列為：PR（A＋B）上游（1950~1967 bp）：5‘AGC CGG TCC GCG TCC AAG3’下游（2174~2191 bp）：5‘CCA CCC AGA GCC CGA GGG3 PRB上游（4~24 bp）：5’ACT GAG CTG AAG GCA AAG GGT3下游（186~204 bp）：5‘GTC CTG TCC CTG GCA GGG C3’PR（A＋B）和PRB目的基因片斷分別為242和201 bp.βactin（內(nèi)參基因）引物序列： 上游：5‘GGC ATG GGT CAG AAG GAT TCC3’ 下游：5‘ATG TCA CGC CAC GAT TTC CCG C3’管家基因片斷500 bp.以上引物均參照說明書用焦碳酸二乙醇（DEPC）水溶解，終濃度為1 pmol/μL