鑒別試驗：
⑴鉀、鈉鹽的火焰反應(yīng)⑵呈色反應(yīng)①羥肟酸鐵反應(yīng)：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。
頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。
②硫酸-硝酸呈色反應(yīng)：頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應(yīng)后成色。
頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。
③茚三酮反應(yīng)：某些具有α-氨基的本類藥物（如氨芐西林）遇茚三酮即顯藍紫色。
④與斐林試劑反應(yīng)：本類藥物具有類似肽鍵結(jié)構(gòu)，可產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。
⑤變色酸-硫酸呈色反應(yīng)：阿莫西林加變色酸-硫酸實際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。
⑥與重氮苯磺酸呈色反應(yīng)：頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng)，顯橙黃色。
⑦與銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。
⑶沉淀反應(yīng)①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。
②有機胺鹽的特殊反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng)：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應(yīng)，生成偶氮染料紅色沉淀。
與三硝基苯酚的反應(yīng)：芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘渣含有二芐基乙二胺，加稀乙醇使殘渣溶解，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。
⑷光譜法①紫外分光光度法吸收波長鑒定法水解產(chǎn)物的吸收波長鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定⑴碘量法（芐星青霉素）
青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。
反應(yīng)分兩步進行：第一步反應(yīng)是按化學計算量進行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應(yīng)受溫度、pH、時間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關(guān)系。因此試驗過程中要嚴格控制溫度，同時采用與青霉素標準品平行對照測定，則可抵消上述可變因素的影響。
碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘，故本法的靈敏度較高。
注意：在滴定終點時放慢滴定速度，并強力振搖；如果滴定至終點又返現(xiàn)藍色，說明真正的終點尚未到達。
⑵汞量法（青霉素鈉、青霉素鉀）
青霉素分子不與汞鹽反應(yīng)，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應(yīng)，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計算青霉素的含量。
電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。
每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的總青霉素。
總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。
注意：青霉素含量計算以第二次滴定終點為依據(jù)；水解必須完全；空白試驗也要稱取供試品，但不經(jīng)氫氧化鈉水解；與碘量法比較，汞量法測定青霉素的主要優(yōu)點是不需要青霉素標準品作對照，汞鹽滴定液用EDTA標定即可。
⑶酸堿滴定法（苯唑西林鈉）
⑷紫外-可見分光光度法⑸高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素
⑴鉀、鈉鹽的火焰反應(yīng)⑵呈色反應(yīng)①羥肟酸鐵反應(yīng)：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。
頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。
②硫酸-硝酸呈色反應(yīng)：頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應(yīng)后成色。
頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。
③茚三酮反應(yīng)：某些具有α-氨基的本類藥物（如氨芐西林）遇茚三酮即顯藍紫色。
④與斐林試劑反應(yīng)：本類藥物具有類似肽鍵結(jié)構(gòu)，可產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。
⑤變色酸-硫酸呈色反應(yīng)：阿莫西林加變色酸-硫酸實際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。
⑥與重氮苯磺酸呈色反應(yīng)：頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng)，顯橙黃色。
⑦與銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。
⑶沉淀反應(yīng)①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。
②有機胺鹽的特殊反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng)：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應(yīng)，生成偶氮染料紅色沉淀。
與三硝基苯酚的反應(yīng)：芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘渣含有二芐基乙二胺，加稀乙醇使殘渣溶解，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。
⑷光譜法①紫外分光光度法吸收波長鑒定法水解產(chǎn)物的吸收波長鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定⑴碘量法（芐星青霉素）
青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。
反應(yīng)分兩步進行：第一步反應(yīng)是按化學計算量進行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應(yīng)受溫度、pH、時間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關(guān)系。因此試驗過程中要嚴格控制溫度，同時采用與青霉素標準品平行對照測定，則可抵消上述可變因素的影響。
碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘，故本法的靈敏度較高。
注意：在滴定終點時放慢滴定速度，并強力振搖；如果滴定至終點又返現(xiàn)藍色，說明真正的終點尚未到達。
⑵汞量法（青霉素鈉、青霉素鉀）
青霉素分子不與汞鹽反應(yīng)，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應(yīng)，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計算青霉素的含量。
電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。
每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的總青霉素。
總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。
注意：青霉素含量計算以第二次滴定終點為依據(jù)；水解必須完全；空白試驗也要稱取供試品，但不經(jīng)氫氧化鈉水解；與碘量法比較，汞量法測定青霉素的主要優(yōu)點是不需要青霉素標準品作對照，汞鹽滴定液用EDTA標定即可。
⑶酸堿滴定法（苯唑西林鈉）
⑷紫外-可見分光光度法⑸高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素