本法系用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。
細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸桿菌提取精制得到的內(nèi)毒素。以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，經(jīng)過(guò)協(xié)作標(biāo)定，使其與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致。細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品用于標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)定、仲裁鱟試劑靈敏度。
細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)定，確定其重量的相當(dāng)效價(jià)。每1ng工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用于鱟試劑靈敏度測(cè)定及試驗(yàn)中的陽(yáng)性對(duì)照。
試驗(yàn)準(zhǔn)備
試驗(yàn)所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是250℃或180℃干烤適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，也可用其它適宜的方法。試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物的污染。
鱟試劑靈敏度復(fù)核
根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值(λ<[b]>),將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水①溶解，在旋渦混合器上混合15分鐘，然后制備成合適的2倍稀釋濃度,即2λ<[b]>、λ<[b]>、0.5λ<[b]>和0.25λ< [b]>備用，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘，按“檢查法”項(xiàng)下試驗(yàn),每一稀釋液平行做4管,如濃度4管均為陽(yáng)性，最低濃度4管均為陰性，按下式計(jì)算鱟試劑靈敏度測(cè)定值(λ<[c]>)。
ΣX λ<[c]>＝log<-1>───
4
X為反應(yīng)終點(diǎn)內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)值。
當(dāng)λ<[c]>在0.5～2.0λ<[b]>(包括0.5λ<[b]>和2.0λ<[b]>)時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查并以λ<[b]>為該批鱟試劑的靈敏度。每批新的鱟試劑在用于試驗(yàn)前都要進(jìn)行 靈敏度的復(fù)核。
供試品干擾試驗(yàn)
按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項(xiàng)下試驗(yàn)，用供試品的有效稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品制成2.0λ<[b]>、λ<[b] >、0.5λ<[b]>、0.25 λ<[b]>濃度稀釋液。供試品的有效稀釋倍數(shù)（D）按下式計(jì)算：
D＝L／λ<[b]> L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，EU／ml。
如果有供試品和無(wú)供試品測(cè)得的鱟試劑靈敏度(λ<[c]>)在0.5～2.0λ<[b]>（包括0.5λ<[b] >和2.0λ<[b]>）時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，否則需進(jìn)行適當(dāng)處理后重復(fù)本試驗(yàn)。使用更靈敏的鱟試劑，對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋，是排除干擾因素的簡(jiǎn)單有效的方法。
檢查法
取裝有0.1ml鱟試劑溶液的10×75mm試管（或0.1ml／支規(guī)格的鱟試劑原安瓿）4支，其中2支加入0.1ml供試品作為供試品管，1支加入2λ<[b]>內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1ml作為陽(yáng)性對(duì)照管, 1支加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水①0.1ml作為陰性對(duì)照管。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃水浴中，保溫60±2分鐘。保溫和拿取試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。
結(jié)果判斷
將試管從水浴中輕輕取出,緩緩倒轉(zhuǎn)180°時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為(+)；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為(-)。供試品兩管均為(-)，應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定；如兩管均為(+)，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如2管中1管為(+)，1管為(-)，按上述方法另取4支供試品管復(fù)試，4管中有1管為(+)，即認(rèn)為不符合規(guī)定。陽(yáng)性對(duì)照為(-)或陰性對(duì)照為(+)，試驗(yàn)無(wú)效。
細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸桿菌提取精制得到的內(nèi)毒素。以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，經(jīng)過(guò)協(xié)作標(biāo)定，使其與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致。細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品用于標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)定、仲裁鱟試劑靈敏度。
細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)定，確定其重量的相當(dāng)效價(jià)。每1ng工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用于鱟試劑靈敏度測(cè)定及試驗(yàn)中的陽(yáng)性對(duì)照。
試驗(yàn)準(zhǔn)備
試驗(yàn)所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是250℃或180℃干烤適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，也可用其它適宜的方法。試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物的污染。
鱟試劑靈敏度復(fù)核
根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值(λ<[b]>),將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水①溶解，在旋渦混合器上混合15分鐘，然后制備成合適的2倍稀釋濃度,即2λ<[b]>、λ<[b]>、0.5λ<[b]>和0.25λ< [b]>備用，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘，按“檢查法”項(xiàng)下試驗(yàn),每一稀釋液平行做4管,如濃度4管均為陽(yáng)性，最低濃度4管均為陰性，按下式計(jì)算鱟試劑靈敏度測(cè)定值(λ<[c]>)。
ΣX λ<[c]>＝log<-1>───
4
X為反應(yīng)終點(diǎn)內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)值。
當(dāng)λ<[c]>在0.5～2.0λ<[b]>(包括0.5λ<[b]>和2.0λ<[b]>)時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查并以λ<[b]>為該批鱟試劑的靈敏度。每批新的鱟試劑在用于試驗(yàn)前都要進(jìn)行 靈敏度的復(fù)核。
供試品干擾試驗(yàn)
按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項(xiàng)下試驗(yàn)，用供試品的有效稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品制成2.0λ<[b]>、λ<[b] >、0.5λ<[b]>、0.25 λ<[b]>濃度稀釋液。供試品的有效稀釋倍數(shù)（D）按下式計(jì)算：
D＝L／λ<[b]> L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，EU／ml。
如果有供試品和無(wú)供試品測(cè)得的鱟試劑靈敏度(λ<[c]>)在0.5～2.0λ<[b]>（包括0.5λ<[b] >和2.0λ<[b]>）時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，否則需進(jìn)行適當(dāng)處理后重復(fù)本試驗(yàn)。使用更靈敏的鱟試劑，對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋，是排除干擾因素的簡(jiǎn)單有效的方法。
檢查法
取裝有0.1ml鱟試劑溶液的10×75mm試管（或0.1ml／支規(guī)格的鱟試劑原安瓿）4支，其中2支加入0.1ml供試品作為供試品管，1支加入2λ<[b]>內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1ml作為陽(yáng)性對(duì)照管, 1支加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水①0.1ml作為陰性對(duì)照管。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃水浴中，保溫60±2分鐘。保溫和拿取試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。
結(jié)果判斷
將試管從水浴中輕輕取出,緩緩倒轉(zhuǎn)180°時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為(+)；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為(-)。供試品兩管均為(-)，應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定；如兩管均為(+)，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如2管中1管為(+)，1管為(-)，按上述方法另取4支供試品管復(fù)試，4管中有1管為(+)，即認(rèn)為不符合規(guī)定。陽(yáng)性對(duì)照為(-)或陰性對(duì)照為(+)，試驗(yàn)無(wú)效。