2.酮肟的生成：如黃體酮與鹽酸羥胺作用生成黃體酮雙酮肟為例。
3.縮氨基脲的生成：ChP收載苯丙酸諾龍生成其縮氨基脲衍生物。
4.酯的水解：如丙酸睪酮用醇制氫氧化鉀水解為例。
水解產(chǎn)物的反應(yīng)戊酸雌二醇、已酸羥孕酮等藥物，先在堿液中水解，經(jīng)酸化加熱分別產(chǎn)生戊酸、己酸特臭，用此法可鑒別這兩種藥物。
紫外分光光度法丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20μg/ml）在239nm波長處有吸收。
紅外分光光度法薄層色譜法中國藥典收載的炔諾酮、炔雌醚片、丙酸睪酮注射液、倍他米松磷酸鈉、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羥孕酮片、醋酸潑尼松片、苯丙酸諾龍注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、復(fù)方己酸孕酮注射液、復(fù)方炔諾酮片、復(fù)方炔諾酮膜、復(fù)方炔諾孕酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、哈西奈德軟膏等甾體激素藥物均采用了薄層色譜（標(biāo)準(zhǔn)品對照法）進(jìn)行鑒別。
高效液相色譜法：
中國藥典中醋酸氟輕松軟膏、醋酸氟氫可的松軟膏、醋酸曲安奈德軟膏、丙酸倍氯米松軟膏、地塞米松磷酸鈉滴眼液、哈西奈德乳膏等的鑒別試驗(yàn)。
特殊雜質(zhì)的檢查1.游離磷酸：地塞米松磷酸鈉（中國藥典收載）、氫化可的松磷酸鈉中檢查游離磷酸。
高法系利用酸性溶液中磷酸與鉬酸作用生成磷鉬酸銨，再經(jīng)還原形成磷鉬酸藍(lán)（鉬藍(lán)），在740nm波長處有吸收。
2.甲醇和丙酮：地塞米松磷酸鈉中檢查甲醇和丙酮。
本品在生產(chǎn)工藝中大量使用甲醇和丙酮，因此藥典規(guī)定作甲醇與丙酮?dú)埩袅繖z查。甲醇限量為3.1ng.3.雌酮：炔雌醇中檢查雌酮。
本法系根據(jù)雌酮的Zimmermann反應(yīng)來檢查的。即在羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中，與間二硝基苯反應(yīng)呈紅～藍(lán)色。雌酮是17-酮甾類，因此根據(jù)該反應(yīng)生成紫紅色化合物。在此操作中，如果不使用純度高的間二硝基苯，則呈褐色而難于判定。
4.硒中國藥典中規(guī)定醋酸地塞米松、醋酸氟輕松要檢查"硒".其原理為在氧瓶燃燒破壞后的吸收液中加鹽酸羥胺，使Se6+還原為Se4+，在pH2.0±0.2的條件下與2.3-二氨基萘試液作用，生成4，5-苯丙苯硒二唑，用環(huán)己烷提取，于378nm波長處呈吸收?？荚囉脮?BR> 5.其他甾體①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定1.高效液相色譜法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法四氮唑鹽的種類：①2，3，4-三苯基氯化四氮唑（TTC），也稱紅四氮唑（RT），其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲zan②藍(lán)四氮唑（BT），即3，3-二甲氧苯基-雙-4，4-（3，5-二苯基）氯化四氮唑，其還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲zan反應(yīng)原理：皮質(zhì)激素C17-α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有還原性，在強(qiáng)堿性試液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲zan.生成顏色隨所用試劑和條件的不同而定，多為紅色或藍(lán)色。
測定方法：中國藥典采用氯化三苯四氮唑法。
例如醋酸潑尼松龍軟膏的含量測定。
討論：
①基團(tuán)影響：C11-酮基的反應(yīng)速度快于C11-羥基甾體；C21-羥基酯化后較其母體羥基的反應(yīng)速度慢；當(dāng)酯化了的基團(tuán)為三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯時，反應(yīng)更慢。
②溶劑和水分的影響：含水量大時會使呈色速度減慢，但含水量不超過5%時，對結(jié)果幾無影響，因此可采用95%乙醇。
③堿的種類及加入順序的影響：在各類堿中，采用氫氧化四甲基銨能得到滿意結(jié)果，故最為常用。以先加四氮唑鹽溶液再加堿液較好。
④空氣中氧及光線的影響：反應(yīng)及其產(chǎn)物對光敏感，故應(yīng)避光。
⑤溫度與時間的影響：一般室溫或30℃恒溫條件下顯色。中國藥典多數(shù)25℃暗處反應(yīng)40～45min.4.異煙肼比色法甾體激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長下具有吸收。
某些具有兩個酮基的甾體激素可形成雙腙，如黃體酮、可的松和氫化可的松等。
本法主要用于甾體激素制劑的測定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測定。
3.縮氨基脲的生成：ChP收載苯丙酸諾龍生成其縮氨基脲衍生物。
4.酯的水解：如丙酸睪酮用醇制氫氧化鉀水解為例。
水解產(chǎn)物的反應(yīng)戊酸雌二醇、已酸羥孕酮等藥物，先在堿液中水解，經(jīng)酸化加熱分別產(chǎn)生戊酸、己酸特臭，用此法可鑒別這兩種藥物。
紫外分光光度法丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20μg/ml）在239nm波長處有吸收。
紅外分光光度法薄層色譜法中國藥典收載的炔諾酮、炔雌醚片、丙酸睪酮注射液、倍他米松磷酸鈉、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羥孕酮片、醋酸潑尼松片、苯丙酸諾龍注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、復(fù)方己酸孕酮注射液、復(fù)方炔諾酮片、復(fù)方炔諾酮膜、復(fù)方炔諾孕酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、哈西奈德軟膏等甾體激素藥物均采用了薄層色譜（標(biāo)準(zhǔn)品對照法）進(jìn)行鑒別。
高效液相色譜法：
中國藥典中醋酸氟輕松軟膏、醋酸氟氫可的松軟膏、醋酸曲安奈德軟膏、丙酸倍氯米松軟膏、地塞米松磷酸鈉滴眼液、哈西奈德乳膏等的鑒別試驗(yàn)。
特殊雜質(zhì)的檢查1.游離磷酸：地塞米松磷酸鈉（中國藥典收載）、氫化可的松磷酸鈉中檢查游離磷酸。
高法系利用酸性溶液中磷酸與鉬酸作用生成磷鉬酸銨，再經(jīng)還原形成磷鉬酸藍(lán)（鉬藍(lán)），在740nm波長處有吸收。
2.甲醇和丙酮：地塞米松磷酸鈉中檢查甲醇和丙酮。
本品在生產(chǎn)工藝中大量使用甲醇和丙酮，因此藥典規(guī)定作甲醇與丙酮?dú)埩袅繖z查。甲醇限量為3.1ng.3.雌酮：炔雌醇中檢查雌酮。
本法系根據(jù)雌酮的Zimmermann反應(yīng)來檢查的。即在羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中，與間二硝基苯反應(yīng)呈紅～藍(lán)色。雌酮是17-酮甾類，因此根據(jù)該反應(yīng)生成紫紅色化合物。在此操作中，如果不使用純度高的間二硝基苯，則呈褐色而難于判定。
4.硒中國藥典中規(guī)定醋酸地塞米松、醋酸氟輕松要檢查"硒".其原理為在氧瓶燃燒破壞后的吸收液中加鹽酸羥胺，使Se6+還原為Se4+，在pH2.0±0.2的條件下與2.3-二氨基萘試液作用，生成4，5-苯丙苯硒二唑，用環(huán)己烷提取，于378nm波長處呈吸收?？荚囉脮?BR> 5.其他甾體①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定1.高效液相色譜法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法四氮唑鹽的種類：①2，3，4-三苯基氯化四氮唑（TTC），也稱紅四氮唑（RT），其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲zan②藍(lán)四氮唑（BT），即3，3-二甲氧苯基-雙-4，4-（3，5-二苯基）氯化四氮唑，其還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲zan反應(yīng)原理：皮質(zhì)激素C17-α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有還原性，在強(qiáng)堿性試液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲zan.生成顏色隨所用試劑和條件的不同而定，多為紅色或藍(lán)色。
測定方法：中國藥典采用氯化三苯四氮唑法。
例如醋酸潑尼松龍軟膏的含量測定。
討論：
①基團(tuán)影響：C11-酮基的反應(yīng)速度快于C11-羥基甾體；C21-羥基酯化后較其母體羥基的反應(yīng)速度慢；當(dāng)酯化了的基團(tuán)為三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯時，反應(yīng)更慢。
②溶劑和水分的影響：含水量大時會使呈色速度減慢，但含水量不超過5%時，對結(jié)果幾無影響，因此可采用95%乙醇。
③堿的種類及加入順序的影響：在各類堿中，采用氫氧化四甲基銨能得到滿意結(jié)果，故最為常用。以先加四氮唑鹽溶液再加堿液較好。
④空氣中氧及光線的影響：反應(yīng)及其產(chǎn)物對光敏感，故應(yīng)避光。
⑤溫度與時間的影響：一般室溫或30℃恒溫條件下顯色。中國藥典多數(shù)25℃暗處反應(yīng)40～45min.4.異煙肼比色法甾體激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長下具有吸收。
某些具有兩個酮基的甾體激素可形成雙腙，如黃體酮、可的松和氫化可的松等。
本法主要用于甾體激素制劑的測定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測定。