化學致突變物的檢測所觀察的現(xiàn)象并不一定就是三類遺傳學損傷,而可能是致突變過程中發(fā)生的其他作用(事件)。
(一)致突變試驗的遺傳學終點和試驗組合的選擇
將致突變試驗觀察到的現(xiàn)象所反映的各種遺傳學事件稱為遺傳學終點。遺傳學終點分為4類:①基因突變;②染色體畸變;③不分離;④原發(fā)性DNA損傷。
成組試驗組合的原則為:①多個遺傳學終點;②原核生物和真核生物;③體外試驗和體內試驗;④體細胞和生殖細胞。
(二)常用的致突變試驗方法
1.細菌回復突變試驗-鼠傷寒沙門菌回變試驗(Ames試驗)
原核生物體外試驗、基因突變。
鼠傷寒沙門菌試驗菌株(突變型)不能自行合成組氨酸,在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上不能生長。突變型試驗菌株可被各種誘變因素誘導,回復突變成野生型,即恢復了合成組氨酸的能力,可在此平皿上生長成可見菌落。
鼠傷寒沙門菌野生型(原養(yǎng)型)←→組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株(his+)回復突變(his)
如果受試物處理組回變菌落數(shù)顯著超過陰性對照組;并有劑量反應關系,即可判定受試物為鼠傷寒沙門菌的致突變物。
Ames試驗中使用的標準菌株為TA97、TA98、TA 100和TA 102.his-突變外,附加突變:①深粗糙型突變(rfa)、②切除修復基因uvrB缺失(△uvrB)和③抗藥因子(R因子即抗氨芐青霉素的PKMl01質粒和抗四環(huán)素的PAQ1質粒)。
TA97和TA98主要用于檢測移碼型突變;TA100和TA102可檢測堿基置換。
有點試驗和摻入試驗兩種。應分別進行不加及加代謝活化系統(tǒng)的試驗,常用為S9混合液,即用多氯聯(lián)苯誘導的大鼠肝勻漿經9000 g離心得到的上清液,再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等輔助因子。
(一)致突變試驗的遺傳學終點和試驗組合的選擇
將致突變試驗觀察到的現(xiàn)象所反映的各種遺傳學事件稱為遺傳學終點。遺傳學終點分為4類:①基因突變;②染色體畸變;③不分離;④原發(fā)性DNA損傷。
成組試驗組合的原則為:①多個遺傳學終點;②原核生物和真核生物;③體外試驗和體內試驗;④體細胞和生殖細胞。
(二)常用的致突變試驗方法
1.細菌回復突變試驗-鼠傷寒沙門菌回變試驗(Ames試驗)
原核生物體外試驗、基因突變。
鼠傷寒沙門菌試驗菌株(突變型)不能自行合成組氨酸,在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上不能生長。突變型試驗菌株可被各種誘變因素誘導,回復突變成野生型,即恢復了合成組氨酸的能力,可在此平皿上生長成可見菌落。
鼠傷寒沙門菌野生型(原養(yǎng)型)←→組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株(his+)回復突變(his)
如果受試物處理組回變菌落數(shù)顯著超過陰性對照組;并有劑量反應關系,即可判定受試物為鼠傷寒沙門菌的致突變物。
Ames試驗中使用的標準菌株為TA97、TA98、TA 100和TA 102.his-突變外,附加突變:①深粗糙型突變(rfa)、②切除修復基因uvrB缺失(△uvrB)和③抗藥因子(R因子即抗氨芐青霉素的PKMl01質粒和抗四環(huán)素的PAQ1質粒)。
TA97和TA98主要用于檢測移碼型突變;TA100和TA102可檢測堿基置換。
有點試驗和摻入試驗兩種。應分別進行不加及加代謝活化系統(tǒng)的試驗,常用為S9混合液,即用多氯聯(lián)苯誘導的大鼠肝勻漿經9000 g離心得到的上清液,再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等輔助因子。