每個人的基因組存在數(shù)百萬個序列變異，但哪些差異對人體和疾病很重要呢？在這一期的《BioTechniques》上，Jeffrey Perkel博士就帶我們看看科學(xué)家如何鑒定和分類重要的遺傳變異。
根據(jù)千人基因組計劃，一般人類基因組與參考人類基因組之間存在400-500萬個變化位點。這些差異包括單堿基改變、短的插入和缺失，以及較大的結(jié)構(gòu)變化，如重復(fù)。絕大多數(shù)變化是良性的，而大約10,000個可能帶來蛋白序列的改變或截短。
面對如此多的變異，可憐的遺傳學(xué)家必須搞清楚哪些改變賦予了特定的表型。許多基因編碼了未知功能的蛋白，而絕大多數(shù)變異又位于編碼區(qū)之外。即使這個基因的功能是已知的，但一個基因的突變或失調(diào)似乎不足以影響表型；它必須在適當(dāng)?shù)臅r間、適當(dāng)?shù)慕M織內(nèi)表達(dá)。
非編碼變異
對于基因組中的非編碼變異，麻省理工學(xué)院（MIT）的Manolis Kellis教授采用六個步驟來分析。1）確定變異在哪些細(xì)胞和組織類型中有活性，2）確定它通過哪個基因起作用，3）確定多個關(guān)聯(lián)變異中的致病突變，4）確定介導(dǎo)表型的DNA結(jié)合蛋白，鑒定失調(diào)的5）細(xì)胞和6）生物體后果。Kellis及其同事通過這種策略，解析了肥胖背后的機(jī)制。這項成果8月發(fā)表在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》上。
FTO基因的突變一直被認(rèn)為與肥胖有著的關(guān)聯(lián)，但人們還不清楚FTO突變是如何導(dǎo)致肥胖的。研究人員發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TO區(qū)域的肥胖風(fēng)險，取決于一個關(guān)鍵的核苷酸。當(dāng)胸腺嘧啶（T）被胞嘧啶（C）取代時，IRX3和IRX5就會啟動并關(guān)閉產(chǎn)熱過程，導(dǎo)致脂質(zhì)堆積和肥胖。當(dāng)C轉(zhuǎn)變?yōu)門的時候，IRX3和IRX5就會關(guān)閉，產(chǎn)熱過程恢復(fù)正常，停止儲存脂肪。
結(jié)構(gòu)的改變
北卡羅萊納大學(xué)（UNC）的助理教授Alain Laederach正在研究單核苷酸變化對RNA結(jié)構(gòu)的影響。他將這種可能影響轉(zhuǎn)錄或翻譯的變異稱為“riboSNitch”，它們可能占了全部SNV的15%左右。2010年，Laederach和同事利用一種SNPfold的計算方法來篩查514個可能影響mRNA二級結(jié)構(gòu)的SNV。他們確定有7種疾病可能歸因于這種變異。
如今，Laederach計劃研究更常見的疾病，如阿爾茨海默病、帕金森氏癥和癌癥。他們采用一種稱為SHAPE的方法，用不同的化學(xué)試劑來修飾單鏈或雙鏈RNA，然后用新一代測序來讀取。同時，斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Howard Chang實驗室也開發(fā)出一種稱為PARS（parallel analysis of RNA structure）的類似方法。
向臨床轉(zhuǎn)化
文章指出，就目前而言，治療仍然是一件很遙遠(yuǎn)的事情。不過，全基因組測序正越來越多地應(yīng)用在臨床上，特別是兒童罕見病和新生兒畸形的診斷。在這類診斷中，速度是最關(guān)鍵的。臨床遺傳學(xué)家一直在加速這個過程。美國兒童慈善醫(yī)院的Stephen Kingsmore團(tuán)隊將危重嬰兒的診斷時間從50小時縮短到26小時。
當(dāng)然，診斷并不一定能帶來行動，畢竟，這些都是遺傳缺陷。兒童慈善醫(yī)院2015年分析的35名嬰兒中，20例得到了診斷（57%），其中65%被認(rèn)為是“臨床上有用的”。即使什么都不能做，確診也能讓父母心里好受些。
從根本上說，研究人員沒辦法來預(yù)測大多數(shù)變異有什么樣的后果。一種可能的方法是窮舉法，系統(tǒng)生成基因中的每個可能變異并檢測活性。另一種方法從單個變異和疾病切入。無論哪種方法，這都將是一段艱難的旅程。“不過，我們最終將會到達(dá)那里，”Kingsmore樂觀地說。
根據(jù)千人基因組計劃，一般人類基因組與參考人類基因組之間存在400-500萬個變化位點。這些差異包括單堿基改變、短的插入和缺失，以及較大的結(jié)構(gòu)變化，如重復(fù)。絕大多數(shù)變化是良性的，而大約10,000個可能帶來蛋白序列的改變或截短。
面對如此多的變異，可憐的遺傳學(xué)家必須搞清楚哪些改變賦予了特定的表型。許多基因編碼了未知功能的蛋白，而絕大多數(shù)變異又位于編碼區(qū)之外。即使這個基因的功能是已知的，但一個基因的突變或失調(diào)似乎不足以影響表型；它必須在適當(dāng)?shù)臅r間、適當(dāng)?shù)慕M織內(nèi)表達(dá)。
非編碼變異
對于基因組中的非編碼變異，麻省理工學(xué)院（MIT）的Manolis Kellis教授采用六個步驟來分析。1）確定變異在哪些細(xì)胞和組織類型中有活性，2）確定它通過哪個基因起作用，3）確定多個關(guān)聯(lián)變異中的致病突變，4）確定介導(dǎo)表型的DNA結(jié)合蛋白，鑒定失調(diào)的5）細(xì)胞和6）生物體后果。Kellis及其同事通過這種策略，解析了肥胖背后的機(jī)制。這項成果8月發(fā)表在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》上。
FTO基因的突變一直被認(rèn)為與肥胖有著的關(guān)聯(lián)，但人們還不清楚FTO突變是如何導(dǎo)致肥胖的。研究人員發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TO區(qū)域的肥胖風(fēng)險，取決于一個關(guān)鍵的核苷酸。當(dāng)胸腺嘧啶（T）被胞嘧啶（C）取代時，IRX3和IRX5就會啟動并關(guān)閉產(chǎn)熱過程，導(dǎo)致脂質(zhì)堆積和肥胖。當(dāng)C轉(zhuǎn)變?yōu)門的時候，IRX3和IRX5就會關(guān)閉，產(chǎn)熱過程恢復(fù)正常，停止儲存脂肪。
結(jié)構(gòu)的改變
北卡羅萊納大學(xué)（UNC）的助理教授Alain Laederach正在研究單核苷酸變化對RNA結(jié)構(gòu)的影響。他將這種可能影響轉(zhuǎn)錄或翻譯的變異稱為“riboSNitch”，它們可能占了全部SNV的15%左右。2010年，Laederach和同事利用一種SNPfold的計算方法來篩查514個可能影響mRNA二級結(jié)構(gòu)的SNV。他們確定有7種疾病可能歸因于這種變異。
如今，Laederach計劃研究更常見的疾病，如阿爾茨海默病、帕金森氏癥和癌癥。他們采用一種稱為SHAPE的方法，用不同的化學(xué)試劑來修飾單鏈或雙鏈RNA，然后用新一代測序來讀取。同時，斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Howard Chang實驗室也開發(fā)出一種稱為PARS（parallel analysis of RNA structure）的類似方法。
向臨床轉(zhuǎn)化
文章指出，就目前而言，治療仍然是一件很遙遠(yuǎn)的事情。不過，全基因組測序正越來越多地應(yīng)用在臨床上，特別是兒童罕見病和新生兒畸形的診斷。在這類診斷中，速度是最關(guān)鍵的。臨床遺傳學(xué)家一直在加速這個過程。美國兒童慈善醫(yī)院的Stephen Kingsmore團(tuán)隊將危重嬰兒的診斷時間從50小時縮短到26小時。
當(dāng)然，診斷并不一定能帶來行動，畢竟，這些都是遺傳缺陷。兒童慈善醫(yī)院2015年分析的35名嬰兒中，20例得到了診斷（57%），其中65%被認(rèn)為是“臨床上有用的”。即使什么都不能做，確診也能讓父母心里好受些。
從根本上說，研究人員沒辦法來預(yù)測大多數(shù)變異有什么樣的后果。一種可能的方法是窮舉法，系統(tǒng)生成基因中的每個可能變異并檢測活性。另一種方法從單個變異和疾病切入。無論哪種方法，這都將是一段艱難的旅程。“不過，我們最終將會到達(dá)那里，”Kingsmore樂觀地說。